196238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás érett HBsAg felületi antigén és hepatitis B vírus elleni vakcina előállítására
1 196238 2 illatokban. A 6. ábra mulatja, hogy szignifikáns anti-HBsAg litert találtunk, mind az autentikus HBsAg-vel immunizált egerekben, mind a szövetkultúrából származó HBsAg-vel immunizált egerekben is. Emellett az anti-HBsAg antitest megjelenésének kinetikája és titere a szövetkultúrából származó HBsAg-vel immunizált egerekben nem volt megkülönböztethető az autentikus HBsAg-vel immunizált egerekben megfigyelttől. Ezért joggal következtethetünk arra, hogy a majomsejtekben rekombináns DNS technikával szántetizált HBsAg imrnunogenitás szempontjából legalább is hasonló, sőt feltehetően azonos a humán szérumból származó HBsAg-vel, amelynek vakcinaként való hatásossága a gyakorlatban már teljesen beigazolódott. Gyógyszerkészítmények A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek az ilyen célokra ismert ejárásokkal alakíthatók gyógyászati felhasználásra alkalmas készítményekké, oly módon, hogy a polipcptidet valamely gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyaggal keverjük össze. Az e célra alkalmas vivőanyagokat és a készítmények előállítása során alkalmazható eljárásokat például az E. VV. Martin által szerkesztett „Remington’s Pharmaceutical Science” c. mű ismerteti. Az ilyen készítmények a polipeptid hatásos mennyisége mellett a vivőanyag megfelelő mennyiségét tartalmazzák. A készítményeket előnyösen parenteráiis beadásra alkalmas alakban készítjük cl. Az állatgyógyászati készítmények a humán gyógyszerkészítményekhez hasonló módon — a szakmabeliek számára kézenfekvő módosításokkal — állítjuk elő. Vakcinák előállítása Vakcinákat a találmány értelmében önmagukban ismert eljárásokkal állíthatunk elő, valamely a találmány szerinti eljárással előállított polipcptidnek valamely vakcinák előállítására alkalmas vivőanyaggal való összekeverése útján. Vivőanyagként például sóoldatok alkalmazhatók, önmagukban ismert segédanyagok és/vagy vírusos fertőzések megelőzésére szolgáló készítményekben szokásos egyéb adalékok hozzáadásával. Az ilyen vakcinák a polipeptid hatásos mennyisége mellett az említett vivóanyag megfelelő mennyiségét tartalmazzák. Előállításukra vonatkozólag utalunk például a „New Trends and Developments in Vaccines” (szerk.: A. Voller és H. Friedman, University Park Press, Baltimore, 1978) c. művére, amelyben a vakcinák előállítására vonatkozólag további részletes adatok találhatók. A találmány szerinti eljárás során az ilyen vakcinák hatóanyagának előállítására alkalmazott különleges módszerek következtében e vakcinák lényegileg mentesek idegen fehérjéktől és egyéb vírus- vagy sejt-komponensektől. Ezért a vakcinák alkalmazása esetén kevésbé valószínű a teljes elölt vagy legyengített vírust tartalmazó vakcinák esetében ismert szövődmények fellépése. A szakmabeliek számára a fenti ismertetés alapján nyilvánvaló, hogy a találmány köre nem korlátozódik a részletesen ismertetett előnyös kiviteli alakokra, hanem általásosságban kiterjed az alábbi igénypontokban meghatározott oltalmi körre. Szabadalmi igénypontok 1 Eljárás prcszekvencia nélküli érett hepatitisz— B felületi antigént mintegy 22 nm átlagos átmérőjű részecskék alakjában tartalmazó antigén-hatóanyag előállítására, azzal jellemezve, hogy — előnyösen pHBV—T— 11-ből eredő — HBV genom, pBR322 és SV40 DNS-szekvenciákat és alkalmas promotort szolgáltató vektorok, célszerűen pHBV—T—1A. pML plazrnid és/vagy SV40 felhasználásával, önmagukban ismert rekombinációs műveletek útján a prcszekvencia nélküli érett HBsAg felületi antigén szekvenciájának kifejezésére alkalmas plazmid-vektorokat, célszerűen a pSVHBSA vagy pHBS348— E illetőleg pHBS348—L plazmid-vektort építünk fel. és ezzel valamely emiösállat-sejtkultúrát, előnyösen majomvcse-íibroblaszt CV—1 vagy COS—7 sejtkultúrát transzformálunk, majd a transzformált szövettenyészetet megfelelő tápközegben szaporítjuk és a termelt antigén-hatóanyagot a közegből kinyerjük. (Elsőbbség: 1981. 12. 03j 2. Eljárás prcszekvencia nélküli érett hepatitisz—B felületi antigént mintegy 22 nm átlagos átmérőjű részecskék alakjában tartalmazó antigén-hatóanyag előállítására, azzal jellemezve, hogy — előnyösen pHBV—T—11-ből eredő — HBV genom. pBR322 és SV40 DNS-szekvenciákat és alkalmas promotort szolgáltató vektorok, célszerűen pHBV—T— 1 A, pML plazrnid és/vagy SV40 felhasználásával, önmagukban ismert rekombinációs műveletek útján a prcszekvencia nélküli érett HBsAg felületi antigén szekvenciájának kifejezésére alkalmas plazmid-vektorokat, célszerű pSVHBSA vagy pHBS348-E illetőleg pHBS348—L plazmidvektort építünk fel, és ezzel valamely cmlősállat-scjtkultúrát, előnyösen majomvcse-fibroblasz.t SV— 1 sejtkultúrát transzformálunk, majd a transzformáit szövettenyészetet megfelelő tápközegben szaporítjuk és a termelt antigén-hatóanyagot a közegből kinyerjük. (Elsőbbség: 1981.08. 31.) 3. E ljárás hepatitisz—B vírus elleni vakcina előállítására. azzal jellemezve, hogy prcszekvencia nélküli crett HBsAg felületi antigént mintegy 22 nm átmérőjű részecskék alakjában tartalmazó, az 1. igénypont szerinti eljárással előállított antigénhatóanyagot gyógyászati szempontból elfogadható vakcira-vivőanyaggal és/vagy a vakcinakészítésben szokásos anyaggal keverünk össze. (Elsőbbség: 1981. 12. 03.) 4. Eljárás hepatitisz— B vírus elleni vakcina előállítására. azzal jellemezve, hogy prcszekvencia nélkül; érett HBsAg felületi antigént mintegy 22 nm átmérőjű részecskék alakjában tartalmazó, a 2. igénypont szerinti eljárással előállított antigénhatóanyagot gyógyászati szempontból elfogadható vakcin i-vivőanyaggal és/vagy a vakcinakészítésben szokásos anyaggal keverünk össze. (Elsőbbség: 19S1. 08. 31.') 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10 9 db ábra
