196237. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán növekedési előhormon előállítására

1

196237

2

4. Táblázat

met ala thr gly ser arg

GG A:C CUG UGG ACA GCU CAC CUA GCU GCA AUG GCU ACA GC.C UCC CGG-20 -in

thr ser leu leu leu ala phe gly leu leu evs leu pro trp

ACG UCC CUG CUC CUG GCU UUU GGC CUG CUC UGC CUG CCC UGG

I

leu gin glu ala val pro phe pro thr ile pro leu ser arg leu phe

CUU CAA GAG GCA GUG CCU UUC CCA ACC AUU CCC UUA UCC AGG CUU UUU

20

asp asn ala met leu arg ala his arg leu his gin leu ala

GAC AAC CGU AUG CUC GCG GCC CAU CGU CUG CAC CAG CUG GCC

SI 40

phe asp thr tyr gin glu phe glu glu ala tyr ile pro lys glu gin

UUU GAC ACC UAC CAG GAG UUU GAA GAA GCC UAU AUC CCA AAG GAA CAG

50

lys tyr ser phe leu gin asn pro gin thr ser leu cys nhe

AAG UAU UCA UUC CUG CAG AAC CCC CAG ACC UCC CUC UGU UUC

m

ser glu ser ile pro thr pro ser asn arg glu glu thr gin gin

UCA GAG UCU AUU CCG ACA CCC UCC AAC AGG GAG GAA ACA CAA CAG

NO

lys ser asn leu glu leu leu arg ile ser leu leu leu ile gin

AAA UCC AAC CUA GAG CUG CUC CGC AUC UCC CUG CUG CUC AUC CAG

90

ser trp leu glu pro val gin phe leu a g scr val phe ala asn

UCG UGG CUG GAG CCC GUG CAG UUC CUC AGG ACU GUC UUC GCC AAC

n*i no

ser leu val tyr gly ala scr asp ser asn val tyr asp leu le

AGC CUG GUG UAC GGC GCC UCU GAC AGC AAC GUC UAU GAC CUC CUA

120

lys asp leu glu glu gly ile gin thr leu met gly arg leu glu

AAG GAC CUA GAG GAA GGC AUC CAA ACG CUG AUG GGG AGG CUG GAA

1.10 M0

asp gly ser pro arg thr gly gin ile phe lys gin thr tyr ser

GAU GGC AGC CCC CGG ACU GGG CAG AUC UUC AAG CAG ACC UAC AGC

lys phe asp thr asn scr his asn asp asp ala leu leu lys asn

AAG UUC GAC ACA AAC UCA CAC AAC GAU GAC GCA CUA CUC AAG AAC

loo 17»

tvr gly leu leu tyr cys phe arg lys lisp met asp lys val glu

UAC GGG CUG CUC UAC UGC UUC AGG AAG GAC AUG GAC AAG GUC GAG

IN»

thr phe leu arg ile val gin cys arg sím- vai glu gly ser cys

ACA UUC CUG CGC AUC GUG CAG UGC CGC UCU GUG GAG GGC AGC UGU

I'XI 101

glv phe AM

GGC UUC UAG CUG CCC GGG UGG CAU CCU GUG ACC CCU CCC CAG UGC

CUC UCC UGG CCC UGG AAG UUG CCA CUC CAG UGC CCA CCA GCC UUG UCC UAA UAA AAU UAA GUU GCA UCA AAA AAA AAA

3. példa

A ptrpED50—HGH plazmid előállítása. 55

A ptrpED5 —1 jelű plazmidot (a Serale Research Laboratories, High Wycombe Bucks, Anglia, intézettől kaptuk), módosítottuk oly módon, hogy beépíthessük és kifejezhessük vele a klónozott növekedési előhormon DNS-t. A ptrpED5—1 gO plazmid az E. coli triptifán (trp) operonjának HindlII fragmenséből származik, a X. trpE bakteriofágból transzferálták, ahogy azt Hopkins és munkatársai (J. Mól. Bioi., 107, 549, 1976) leírják, majd Bolivar és munkatársai szerint (Gene, 2, 95, 65

1977) beépült a pBR322 HindlII helyére.

A ptrpED5 —1 plazmidot HindlII enzimmel

hár ítjuk és a dezoxiribonukleinsav-polimeráz I Klenow fragmensével kezeljük az egyszálú 5'-végek párosítására (lásd. Seeburg és munkatársai, mint előbb). A plazmid dezoxiribonukleinsavhoz dekanukleotid Hindii! szakaszt (CCAAGCTTGG) kötünk. Ezután HindlII enzimmel ink ibáiva kohézív végeket állítunk elő és Sephadex (kereskedelmi név, Pharmacia Inc., Uppsala, Svédország) G —100 gyantán végzett kromatográfiával izoláljuk. A körkörös plazmidot T4-dezoxiribonukleinsav-ügázzal regeneráljuk és felhasználjuk az E. coli RR--I törzsének transzformálására. A tprpED50 plazmidot tartalmazó kiónokat ampiciilin rezisztencia alapján szelektálva izoláljuk.

Az 1. cs 2. példában megadott módon kapott

12