196229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A 40926 antibiotikum N-acilamino-glukuronil-aglikonjai és az A 40926 antibiotikum aglikonjai, valamint az ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

1 196229 2

Ai 2 komponenséhez viszonyítva 1,32 az előbbiekben ismertetett rendszerben.

Az A 40926 antibiotikum aglikonja a következő tulajdonságokat mutatja:

A) a 8. ábra szerinti UV abszorpciós spektruma a következő -abszorpciós maximumokat mutatja:

lambdaTMax (nm)

a) 0,1N HC1 280

b) pH 7,4 foszfát puffer 280; 310 (váll)

c) 0,1N KOH 299

B) a 9. ábra szerinti IR abszorpciós spektruma a következő abszorpciós maximumokat mutatja

(cm-1):

3700—3100; 3000—2800 (nujol); 1655; 1620— 1550; 1500; 1460 (nujol); 1375 (nujol); 1300; 1205; 1145; 1010; 970; 930; 840

C) a 10. ábra szerinti 'H—NMR spektruma a következő jel-csoportokat (ppm-ben) mutatja 270 MHz-en DMSO—d6 (hexametildeutero-dímetilszulfoxid) és CF3COOH elegyében felvéve, belső standardként (0,00 ppm) ZTMS-t alkalmazva (delta, ppm):

2,51, s (DMSO-dj); 2,50, s (NCH3); 2,88, m (Z2);

3,33, m (Z’2); 4,10, m (X6); 4,34, d (X5); 4,43, d (X7); 4,93, m (X2); 5,04, s (4F); 5,09, s (Z6); 5,54, d (X4); 5,75, s (4B); 6,05, d (X3); 7,76, s (6B);

6,3—8,4 (aromás és peptid NH-k)

D) retenciós idő (Rt) 0,59 a teikoplanin A2 2 komponenséhez (Rt = 20,3 perc) viszonyítva, fordított fázisú HPLC-vel a kővetkező körülmények között végezve a meghatározást:

oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm/Altex/Beckman)

4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm élő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm)

A eluálószer: CHjCN 10%

NaH2PCVH20(2,5g/l) 90%

pH 6,0-ra beállítva

B eluálószer: CH3CN 70%

NaHiPOv H2O (2,5 g/1) 30%

pH 6,0-ra beállítva

eluálás: lineáris grádiens (5%—60% B eluálószer A eluálószer ben), 40 perc alatt áramlási sebesség: l,8ml/perc UV detektor: 254 nm

belső standard: teikoplanin A2 2 komponens (Gruppo Lepetit S. p. A.) Ugyanilyen körülmények között az L 17054 antibiotikumhoz (Gruppo Lepetit S. p. A., 119575 sz. európai szabadalmi bejelentés, közzétéve 1984. szeptember 26-án) viszonyított retenciós idő 1,42.

E) molekulatömege kb. 1211 FAB—MS-sel meghatározva

F) sóképzésre képes savas csoportok

G) sóképzésre képes amino-csoport

H) a maghoz nem kapcsolódik mannóz-egység. A fizikokémiai adatok alapján és az ugyanezen

osztályba tartozó ismert antibiotikumok szerkezetének ismeretében az A 40926 antibiotikumnak N-acilaminoglukuronil-aglikonnak az olyan előbbi

(I) általános képlet tulajdonítható, amelyben A jelentése N-(ll—12: szénatomos)-acrlaminoglukuronil-csoport és B jelentése hidrogénatom. Közelebbről:

— az olyan előbbi (I) általános képlet, amelyben A jelentése n-undekanoilaminoglukuronil-csoport és B jelentése hidrogénatom, az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon A faktornak tulajdonítható;

— az olyan előbbi (í) általános képlet, amelyben A jelentése izododekanoilaminoglukuronil-csoport

5 és B jelentése hirdogénatom, az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon Bo faktornak tulajdonítható;

— az olyan előbbi (I) általános képlet, amelyben A jelentése n-dodekanoilaminoglukuronil-csoport

1C és B jelentése hidrogénatom, az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon Bi faktornak tulajdonítható.

Ez utóbbi a találmány szerinti eljárással az A 40926 antibiotikum Bi faktorból állítható elő, 15 amely faktor az A 40926 antibiotikum B faktor komponense; R, értéke a teikoplanin A2 2 komponenshez viszonyítva 1,27 a 177882 sz. európai szabadalmi bejelentésben leírt és az alábbiakban ismertetett fordított fázisú rendszerben. Az A 40926 2p antibiotikum B faktorból a Bo faktor (a nagyobb mennyiségben jelenlevő faktor) elkülönítése után állítható elő.

Az olyan előbbi (I) általános képlet, amelyben A és B jelentése hidrogénatom, az A 40926 antibioti- 25 kum aglikonnak tulajdonítható,

A leírásban és az igénypontokban A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon komplexről vagy ennek faktorairól vagy az A 40926 antibiotikum aglikonról mondottak magukban foglal- 30 ják a „belső só” alakot, valamint az esetleges savas és bázisos addíciós sókat is.

A találmány szerinti vegyületek antibakteriális aktivitása in vitro a standard hígítási próba segítségével mutatható ki, különböző mikroorganizmu- 35 sok alkalmazásával.

Az MIC érték (minimális gátló koncentráció) meghatározásához alkalmazott táptalajok és tenyésztési körülmények a következők:

4C — Isosensitest húsleves (Oxoid) — 24 óra a Staphylococcus törzsek, a Streptococcus faecalis és a Gram-negatív baktériumok (E. coli) esetében;

— Todd—Hewitt húsleves (Difco) — 24 óra más Streptococcus törzsek esetében;

46 — GC alap-húsleves (Difco) + 1% ísovitalex

(BBL), 48 óra, CCh-ban dúsított atmoszféra a Neisseria gonorrhoeae esetében;

— Brain Heart húsleves (Difco) + 1% C adalék (Difco) — 48 óra a Haemophilus influenzae esetése ben;

— AC leves (Difco), 24 óra, anaerob atmoszféra a Clostridium perfringens esetében;

— Wilkins-Chalgren agar (T. D. Wilkins és S, Chalgren, Antimicrob. Ag. Chemother. 10, 926,

55 1976), 48 óra, anaerob atmoszféra a többi anaerob

(C. difficile, Propionibacterium acnes, Bacteroides fragilis) esetében;

— PPLO leves (Difco) + 10% lószérum + 1% glükóz, 48 óra a Mycoplasma gallisepticum eseté-6C ben;

— PPLO leves adalékokkal (R. T. bvans, D. Taylor-Robinson, J. Antimicrob. Chemother. 4, 57), 24 óra az U. urealyticum esetében.

Az inkubálást 37 °C-on végezzük.

65 Az inokulumok a következők:

— 1% (térf./térf.) 48 órás leves tenyészetből a

M. gallisepticum esetében;

4