196226. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, antiamnéziás hatású, tripeptid származékok, valamint ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 196226 2 sukban felülmúlják a MIF-et, és a találmányunk szerinti eljárások biztosítják a hatóanyagok gyakorlati célokra szükséges mennyiségben való előállítását. A találmányunk szerinti (I) általános képletű tripeptid-származékok különösen azokban az esetekben kerülhetnek alkalmazásra, amelyekben a betegnél a memória folyamatok akut vagy krónikus zavara áll fenn. Az L-DOPA potencírozó hatást pedig főleg a Parkinson-kórban szenvedő betegek kezelésénél lehet használni. Az (I) általános képletű tripeptid-származékokat célszerűen a gyógyászatban szokásos kikészítési formákban alkalmazzuk. Ezek a kikészítési formák (gyógyszerek) szilárd, folyékony vagy félfolyékony halmazállapotúak lehetnek és előállításuknál az ilyen készítmények előállításánál szokásos töltő, hígító, stabilitás fokozó, pH, ozmózisnyomás befolyásoló, íz-, illatadó, valamint a formulázást megkönnyítő, illetve lehetővé tevő adalék és segédanyagokat használjuk fel. A gyógyászati készítményből a betegnek olyan mennyiséget adunk be, amely a hatóanyag kívánt hatás eléréséhez szükséges dózisát tartalmazza. Ez a dózis a betegség fokától, a beteg testsúlyától és a hatóanyaggal szembeni érzékenységétől, a beadás módjától és a napi kezelések számától függ. A mindenkor alkalmazandó hatóanyag dózist a kezelőorvos a kezelendő beteg ismeretében szakismeretei alapján biztonsággal meg tudja határozni. A leírásban alkalmazott aminosav-csoport és védő-csoport rövidítések megegyeznek a szakirodalomban széles körben alkalmazott rövidítésekkel. Ezek összefoglalása megtalálható a J. Bioi. Chem., 247, 977. (1972) alatti szakcikkben. Az Fmoc rövidítés 9-fluorenil-metil-oxi-karbonil-, a HPro homprolil- (azaz 2-pirrolidinil-acetil-), a GABA y-amino-butiril-, a Pip-2-piperidín-karbonil-csoportot, a Glp- pedig piroglutamil-csoportot jelöl. Az olvadáspontokat Boetius-készülékben (VEB Analytik Dresden gyártmányú) határoztuk meg. A vékonyréteg-kromatográfiás méréseket DC-Alufolien Kieselgel 60 típusú, Merck gyártmányú lapokon végeztük. Futtatószerként az alábbiakat használtuk. Az arányok térfogatarányt jelölnek. A: n-butanol-ecetsav-víz 4:1:1 B: etil-acetát 95% + (piridin-ecetsav-víz 20:6:11) 5% C: etil-acetát 80% + (piridin-ecetsav-víz 20:6:11) 20% D: kloroform-metanol 9:1. A vékonyréteg lapok előhívását ninhidrin és klór tolidin/jód reagenssel végeztük. Az aminosav összetétel meghatározását úgy végeztük, hogy a vizsgálandó anyagot 24 órán át 110 °C-on 6n vizes só sav-oldatban hidrolizáltuk, majd a kapott hidrolizátumot AAA 881 típusú automatikus aminosav analizátorral (Mikrotechna cég gyártmánya, Prága, Csehszlovákia) analizáltuk. Az optikai forgatóképesség mérése Polamat A típusú (Zeiss cég gyártmánya, Jéna, NDK) polariméterrel történt. A nagynyomású folyadékkromatográfiás felvételek ODS Hypersil töltetű oszlopon (Merck cég gyártmánya, Darmstadt, NSZK) történtek acetonitril és 0,03 m koncentrációjú, 7,5 pH-jú foszfát puffer 6:4 térfogatarányú elegyével, a frakciókat 215 nm-es UV fényben ellenőriztük. Az oszlopkromatográfiás tisztításokat szintén Merck gyártmányú Kieselgel 60 töltetű oszlopon, a fentiekben megadott B, illetve C jelű eluenssel végeztük. A találmányunk további részleteit a találmány korlátozásának szándéka nélkül az alábbi kiviteli példákkal mutatjuk be. /. példa BOC-GA BA-Pro-Leu-Gly-NHi a) BOC-GA BA -Pro-Leu-Gly-O-gyanta 6 g 1% divinil-benzollal kopolimerizált, klórmetilezett, 99%-os polisztirol gyantát (FLUKA gyártmány; a klórmetilezés foka: 1,04 mmól/lg gyanta) 25 ml etanolban szuszpendálunk. Az alkoholos szuszpenzióhoz 1,68 ml (12 mmól) trietil-amint és 2 g (12 mmól) BOC-Gly-OH védett glicint adunk, majd a reakcióelegyet 80 órán át visszafolyatás közben forraljuk. Lehűlés után a reakcióelegyből kiszűrjük a gyantát, majd kétszer 30—30 ml etanolial és diklór-metánnal mossuk, végül vákuumexszikkátorban foszfor-pentoxid felett szárítjuk. A kapott gyanta grammonként 0,42 mmól glicint tartalmaz. 4 g fentiek szerint kapott BOC-Gly-O-gyantát bemérünk egy, a szilárd fázisú szintéziseknél használt, szűrővel ellátott, úgynevezett Merrifieldedénybe, majd 30 ml dimetil-formamidot adunk hozzá, és rázógépen 24 órán át rázatva duzzasztjuk. Ezután az oldószert leszívatjuk, a gyantát háromszor 30—30 ml diklór-metánnal, etanollal és ecetsavval 3—3 perces mosási időkkel mossuk. A mosott gyantához 30 ml 2n, jégecetes hidrogénklorid-oldatot adunk, és 15 percig rázatjuk. A hidrogén-kloridos—jégecetes rázatást a jégecetes oldat leszívatása után 30 ml friss oldattal megismételjük. Ezt követően a kapott H-Gly-O-gyantát háromszor 30—30 ml ecetsavval, etanollal és diklórmetánnal, majd az amino-csoporton megkötött sósav eltávolítására kétszer 30—30 ml 10% trietilamint tartalmazó diklór-metánnal, majd háromszor 30—30 ml diklór-metánnal rázatva mossuk. A mosott gyantáról leszívatjuk az oldószert, 30 m' friss diklór-metánt öntünk rá, majd 760 mg (3,36 mmól, 4 mól ekvivalens) BOC-Leu-OH védett leucint és 336 mg (1,68 mmól, 2 mól ekvivalens) diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá és 2 órán át rázatjuk. Ezután újabb 336 mg (1,68 mmól, 2 mól ekvivalens) diciklohexil-karbouiimidet adunk hozzá, és további 2 órán át rázatjuk. A reakcióelegyet leszívatjuk a gyantáról, majd 30 ml friss diklór-metánt, 760 mg (3,36 mmól, 4 mól ekvivalens) BOC-Leu-OH védett leucint és 672 mg (3,36 mmól, 4 mól ekvivalens) diciklohexil-karbod imidet adva a gyantához a reagáltatást még 24 ó.-áig folytatjuk. A reagáltatás végén a reakcióelegyet leszívatjuk a kapott BOC-Leu-Gly-O-gyantáról, majd mindenben a BOC-Gly-O-gyantánál megadottak szerűt eljárva jégecetes hidrogén-klorid-oldattal eltá-' volítjuk a BOC-védőcsoportot, és BOC-Leu-OH védett leucin helyett azzal ekvivalens (722 mg, 3,36 mmól) mennyiségű BOC-Pro-OH védett prolint és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
