196217. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új vinblasztin-fehérje konjugátumok és származékaik, valamint ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 196 ?17 2 5. példa Alfa- és béta izomer N-(4-0-dezacetil-4-0-L-N-acetil-hemiaszpartát- vinb!asztinoil-23)-L-etil-izoleucinát A 4. pclda szerint eljárva N-(dczacetil-4-0-vinb!asztinoil-23)-L-etil-izoleucinátot N-(4-0-dczacctil-4-O-L-N-acctil-hemiaszpartát-vinblasztinoil- 23)-L-eíiI-izolcucináttá alakítunk. Töincgspektrum (DCI, accton): 1051 (tvR), 1036, 1009, 977, 897, 838,755, 709, 652. TR spektrum (KBr): 3410, 2963, 2929, 2880, 1734, 1676, 1612, 1500, 1460, 1430, 1372, 1333, 1293 cm-1. 6. példa Alfa- és gamma izomer 4-0-dezacetil-4-0-L-N-acctil-hemiglntamát-vinblasztin A 2. példa szerint eljárva 4-0-dczacctil-vinblasztint N-acetil-L-glutaminsavanhidriddel kezelünk, amikoris271 g4-0-dczacctil-4-0-L-N-acctil-hcmiglutamát-vinblasztint nyerünk alfa cs gamma izomerjeik formájában, 380 mg 4-0-dczacctil-vinblasztinból kiindulva. Tömcgspcktrum (DCI, aceton): 940 (M+1), 871, 707. ÏR spektrum (KBr): 3470, 2960, 2880, 1740, 1665, 1617 cm-'. 7. példa 4-0-dezacetil-4-0-N-acetil-hemiaszpartát-vinblasztin és CTMOl* fehérje kapcsolása 0,77 g (0,83 mmól) 4-0-dczacctil-N-acctil-hcmiaszpartátot 72 ml dioxánban oldunk, jégfürdőben lehűtjük, hozzáadunk 1,66 mmól trictil-amint és 1,66 mmól klór-hangyasav-izobutil-észtcrt és a kapott keveréket 15 percen át keverjük. Közben a kapcsolni kívánt monoklón antitest (Ig G típus) 2,5 g-ját 2 ml 0,1 mólos foszfát pufferban oldjuk pH = 8,5 értéken. A 15 perc elteltével a monoklón antitest oldatot a fenti aktivált észterhez adjuk és szobahőmérsékleten 24 órán át keverjük. A kapott konjugátumot gél-szűrjiik 9 ezrelékes kálcium-klorid oldattal kiegyensúlyozott Scphadex 25 oszlopon (2,6x40 cm) pH = 7,5-cn. A konjugátumot tartalmazó frakciókat egyesítjük, betöményítjük, ultraszűrjük, sterilizáljuk. A meghűtöít vinblasztín-hcmiaszpartát mennyiségét radioaktivitás mérés segítségével határozzuk meg. A kapott konjugátum4,7 mól vinblasztint tartalmaz 1 mól lg G-rc számolva. Rctcnciós idő (Sorbax GF 250, GF 450 oszlop): 19347. Kitermelés 51% az antitestre számolva. * = Hunion tejzsír-vörösvértcst membrán elleni monoklón antitest amely felismeri a humán mell carcinoma sejteket biopsisban vagy áttételben. (B. Lcclef és A. Trónét: Revue IRFTijdschrift 11, (2) (1987). 8. példa EtH-N-(4-0-dczucctil-4-0-N-acetil-hcnmszpartátvinblasztinoil-23 ) - L-triptofanát kapcsolása a 4. példa szerint nyert terméket a 3a) példa szerint eljárva galaktozilált humán albuminhoz kapcsolunk. A kapott konjugátum 1 mólgálaktozilált humán albuminra vonatkoztatva 7 vinkamolekulát tartalmaz. Rctcnciós idő (Sorbax GF250 és GF450 oszlopon): 20’240, kitermelés: 57% tíz albuminra vonatkoztatva. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás (1) általános képlctű vinblasztin konjugátumok — a képletben A jelentése: — CO—(Cl I2)n—Cl ICO— vagy NH-R —COCII—(Cl I2)„—CO— képlctű csoport, NH-R amelyben N jelentése 1 vagy 2 és R jelentése 2—5 szénatomos alkanoil-, vagy bcnzil-oxi-karbonil-csoport, R' jelentése immunoglobulin- vagy adott esetben galaktozilált albumin-csoport R2 jelentése mctoxi-csoport R3 jelentése o-hidroxilcsoport azzal jellemezve, hogy (II) általános képlctű sav anhidridjét vagy annak aktivált származékát a 4-dczacetil-vinblasztinnal kondenzáljuk, majd a kapott terméket a fenti R'-nek megfelelő fehérjével kondenzáljuk és a kapott vcgyülctct ismert módon a rcakcióclcgyből kinyerjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az első kondenzálást túlnyomórészt diklór-mctán oldószerben és a második kondenzálást víz/dioxán elegyben végezzük. 3. Az 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (II) általános képlctű kiindulási vegyidet aktiválását klór-hangyasavas-alkil-észterrcl, így például -etil- vagy izobutil-észtcrrcl végezzük. 4. Az 1 —3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kapott terméket centrifugáljuk, mossuk, iiofilizáljuk és/vagy gélszűréssel tisztítjuk. 5. Az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy immunoglobulinként humán monoklón antitest eljárással nyert immunoglobulint alkalmazunk. 6. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, 1—5. igénypont szerint előállított (I) általános képlctű vinblasztin konjugátumot. — a képletben A, R(, R, és R3 jelentése a fenti — gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyaggal és/vagy egyéb segédanyaggal összekeverünk és adagolásra alkalmas gyógyszerkészítménnyé alakítjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 1 db ábra 5
