196048. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új fenol-származékok és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 Találmányunk új fenol-származékok előállítására vonatkozik. Többszörösen telítetlen magasabb szénatomszámú zsírsavak (pl. arachidonsav) az ember és emlősállatok anyagcseréjében a Slow reacting Substance of Anaphylaxis (SRS-A) néven is ismert vegyület-család, a fiziológiai szempontból fontos eikozanoidok (pl. posztaglandinok és leukotriének) enzimatikusan katalizált képződésénél szubsztrátumként szolgálnak. A prosztaglandinok képződését a ciklo-oxigenéz (más néven prosztaglandin-szintézis), míg a leukotrién-képződést az 5-lipoxigenáz katalizálja. A prosztaglandinok a szervezetben egy sor kívánatos hatást fejtenek ki. Ezzel szemben ismeretes, hogy a leukotriének, illetve a SRS-A allergiás reakciók, hörggörcsök, gyulladások, asztma és számos más nemkívánatos folyamat kialakulásáért felelősek. Ezért kívánatos olyan, kémiailag és a metabolizmus szempontjából stabil vegyöletek előállítása, amelyek a prosztaglandín-képződést nem befolyásolják, ugyanakkor azonban az 5-lipoxigenázt lehetőleg szelektíven, illetve specifikusan gátolják és a nemkívánatos leukotriének képződését megakadályozzák. Azt találtuk, hogy bizonyos, a 4-helyzetben telítetlen 11 -hidroxi-alkil-esoportot tartalmazó fenil-származékok kémiailag és a metabolizmus szempontjából a gyógyászati felhasználás céljainak megfelelően stabilak és az 5-lípoxigenázt specifikusan gátolják. Találmányunk tárgya eljárás (I) általános képletü fenol-rászmazékok előállítására — a képletben A és B azonos vagy különböző lehet és jelentésük -C=C-, cisz -CHCH- vagy transz -CH=CH- csoport, Rí jelentése hidrogénatom, egyenesláncú 1-6 szénatomos alkilcsoport, fenilcsoport vagy 5-7 szénatomos cikloalkilcsoport, Rí jelentése hidrogénatom, metil-vagy etilcsoport, R3 jelentése hidrogénatom, acetil- vagy propionilcsoport, ' R4 jelentése hidrogénatom, acetil- vagy propionilcsoport vagy 1—3 szénatomos alkilcsoport, Rs jelentése -COORl0 általános képletű csoport, ahol Rjo hidrogénatomot vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport jelent, vagy (B) általános képletü csoport, ahol Ri 1 és Rj 2 azonos vagy különböző lehet és jelentésük hidrogénatom vagy 2-hidroxi-etil-csoport, vagy Rí 1 és Rj; együtt -(CH^ jq csoportot képeznek és q értéke 4,5 vagy 6, vagy hidroxil-, acetoxi- vagy propionilcsoport vagy 1-3 szénatomos alkoxicsoport vagy Rä és-OR4 együtt metiléndioxicsoportot képeznek és Re jelentése hidrogénatom, hidroxil-, acetoxi- vagy propioniloxicsoport vagy 1-3 szénatornos alkilcsoport vagy 1-3 szénatomos alkoxicsoport. Előnyösen azok az (i) általános képletű vegyületek, amelyekben A és B azonos és jelentésük előnyösen -C=C- vagy cisz -CH=CH- csoport. Amennyiben A és B eltérő jelentésű, B előnyösen -C=C- csoportot képvisel. R4 jelentése előnyösen hidrogénatom. Az (1) általános képletű vegyületek fenti előnyös csoportjai az alábbi általános képleteknek felelnek meg. 1) Az A és B helyén -C=C- csoportot tartalmazó vegyületak az (I) általános képlettel jellemezhetők. 2) Az A és B helyér^cisz -CH=CH- csoportot tartalmazó vegyületek az (i”) általános képletnek felelnek meg. 3) Az eltérő A és B csoportokat és B helyén -C=€csoportot tartalmazó vegyületek az (i’”) általános képlettel je He mzhetők. A fenti képletekben R(, R2, R3, Rj, Re és A jelentése a fent megadott. Különösen előnyös tulajdonságokkal rendelkeznek azok az (I) illetve (I*), (i’ ) és (I ’) általános képletű vegyületek, amelyekben R3 és R3 jelentése hidrogénatom, Rí jelentése előnyösen hidrogénatom, egyenesláncú 1—6 szénatomos alkilcsoport vagy fenil- vagy ciklohexilesoport. j R5 jelentése előnyösen (B) általános képletű csoport - ahol Rj 1 és R13 a fent megadott, vagy 1-3 szénatomos alkoxicsoport — előnyösen metoxicsoport - vagy hidroxilcsoport. ; Az (I) általános képletű vegyületek az 5-lipoxigenáz aktivitását specifikusan gátolják. Ezt a hatást in vitro kísérletekkel igazoljuk. Az 5-lipoxigenáz gátlásának meghatározása céljából bazofil leukémiás patkány-leukocitákat in vitro tenyésztünk és kb. 16® sejt/ml sejtsűrűség elérése után a tápközegtől 400 g mellett centrifugálással elválasztunk. A maradékot 50 millimólos kalium-foszfát-pufferben (pH 7,4) szuszpendáljuk, a sejtszám 1,5 107 sejt/ml. A kapott szuszpenzió 1—1 ml-es mennyiségét indometacinnal-(lO janól).és kalcium-kloriddal (2 millimól) elegyítjük és a tesz-vegyület jelenlétében vagy anélkül radioaktív jelzett arachidonsawal .és kalcíum-Io rofor A 23 187-el szobahőmérsékleten 5 percen át inkubáljuk. Az elegyet pH 5 értékre savanyítjuk, majd az 5-lipoxigenáz hatására képződő arachidonsav-metabolitokat etil-acetáttal extraháljuk és leukotriének számára megfelelő futtató-rendszerrel vékonyrétegkromatográfiás úton szétválasztjuk (Jakschik és tsai: Biochem. Biophys. Res. Commun. 102, 624 /1981 /). A különböző metabolitok közötti radioaktivitás-eloszlást vékonyréteges scanner segítségével mérjük. Az IC5 o -I értéket (azaz az 5-lipoxigenáz 50%-os gátlásához szükséges koncentrációt) oly módon határozzuk meg, hogy az 5-Iipoxigenáz-termékek (5-HETE és LTB4) százalékos képződési arányát összevetjük a betáplált összradioaktivitás, illetve (I) általános képletű teszt-vegyület mennyiségével, illetve koncentrációjával. Az (1) általános képletű vegyületeknek a ciklooxigonáz-akti vitásra kifejtett hatását káli um-foszfát-pu fferben (50 millimól, pH 7,5)szuszpendált birkaondóhólyagmikroszómák segítségével határozzuk meg, a teszt-vegyülettel és ,4C jelzett arachidonsawal szobahőmérsékleten végzett 10 perces inkubálás útján. Jégecet hozzáadása után etil-acetáttal extraháljuk és az extraktumok bepárlása után kapott maradékot kovasavgél-vékonyréteglemezeken 50:50:1 arányú éter-hexán-jégecet eleggyel szétválasztjuk. A képződő prosztaglandinok, illetve a változatlan arachidonsav radioaktivitás-eloszlását meghatározzuk és az egyes teszt-vegyületek ICS0-II értékét kiszámítjuk (ez a cik- Jooginezáz 50%-os gátlását előidéző dózis). Az I. táblázatban a találmányunk szerinti eljárással előállítható vegyületek egyes képviselőinek hatását az 196.048 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
