195979. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antraciklin származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
11 195979 12 500 ml-es Erlenmeyer-lombikba 100- -100 ml fenti tápkőzeget, illetve 5 literes palackba 1 liter tápközeget adunk és 121 °C-on 30 percen át sterilizáljuk. A lombikokat, illetve a palackot lehűtjük, a spóraszuszpenzióval beoltjuk, majd 3,75 cm amplitúdójú, 240 perc*1 frekvenciájú rotációs rázógépben 30 °C-on 72 órán át rázzuk. A kapott kultúrát 15 literes üvegfermentor beoltására használjuk fel; az üvegfermentorban 10 liter 5 tF%-os, fenti összetételű közegen a 2. lépcső oltóanyagát állítjuk elő. A fermentálást 26 °C-on (±1 °C), keverés közben 160-180 perc*1 frekbencia és 6-7 liter/perc levegőztetés mellett végezzük. A kapott tenyészetet a termelő közeg beoltásához használjuk fel. A termelő közeg összetétele glükóz 20.0 g malátakivonat 10.0 g élesztőkivonat 4.0 g deszt. víz 1 liter pH 6.8 Habzásgátlóként minden fermentorba 0,025% Desmophen-t adtunk. A fenti tépközeg 260 1-jét 390 liter térfogatú fermentorba töltjük. A közeget indirekt fűtéssel és vízgőz direkt bevezetésével 121 °C-on 28 percen át sterilizáljuk, majd a 3. lépcsőben készített oltókultúrával (5+f%) beoltjuk. A fermentálást 26 °G-on (±1 °C), keverés közben 100-200 perc-1 frekvencia és 9-10 m3/óra levegőztetés mellett 68-72 órán át végezzük. A fermentálás végén a tenyészlé 100-150 ju/ml koncentrációban tartalmazza az antibiotikumot, a pH-érték 5,5-6,0. A tenyészlé maradók cukortartalma 0,03-0,5%, a micélium nedvességtőmege 3-4 g/tf%. 3. példa Az antibiotikum-komplex fermentációs előállításához szükséges Y-ll 472 jelű Streptomyces purpurascens törzs elötenyésztése a) (1) Az elökultúra közeg összetétele Gram-oltópor 10.0 g dextróz 10.0 g NaCl 5.0 g CaC03 3.0 g deszt. viz 1 liter pH 7.0 72 óra 30 °C-on rmelö közeg összetétele keményítő 10.0 g glükóz 10.0 g malátakivonat 7.5 g pepton 7.5 g NaCl 3.0 g MgSCh 1.0 g KH2PO4 2.0 g CuS04.5H20 0.007 g FeS04.7Hz0 0.001 g MnS04.4H20 0.008 g ZnS04.7Hj0 0.002 g deszt. viz 1 liter pH 7.0 A fermentálás időtartama: 88-96 óra módja: 2. példa szerint b) (1) az elökultúra közeg összetétele malátakivonat 10.0 g élesztőkivonat 4.0 g glükóz 4.0 g deszt. víz 1 liter pH 7.0 Fermentálás: 72 órán át 30 °C-on. (2) a termelő közeg összetétele keményítő 10.0 g glükóz 10.0 g szójaliszt 15.0 g K2HPO4 1.0 g MgSOí 1.0 g NaCl 3.0 g CuS04.5H20 0.007 g FeS04.7H20 0.001 g MnCl2.4H20 0.008 g Z11SO4.7H2O 0.002 g deszt. víz 1 liter pH Fermentáció befejezése: 88-96 óra elteltével. 7.0 4. példa Az antraciklin-vegy öletek keverékének elkülönítése 300 literes fermentorból kiveszünk mintegy 250 1 tenyészoldatot. Az oldatot centrifugáljuk. a) 200 1 szűrlet pH-értékét nátrium-hidroxid-oldattal 7,5-re állítjuk. Az oldatot 50-50 1 etil-acetáttal kétszer extraháljuk, utána a szerves fázist vákuumban betőmónyitjük. Az ennek során kiváló vizes fázist elkülönítjük és etil-acetáttal utóextraháljuk. Az egyesitett szerves fázisokat vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 650 ml toluolban feloldjuk, az oldatot 300-300 ml 3,5 pH-jú nátrium-acetát-pufferrel 5x extraháljuk, és a toluolos fázist vákuumban bepároljuk (vörös olajos maradék, A-frakció). Az egyesített vizes fázis pH-értékét 2 n nátrium-hidroxid-oldattal 7,5-re állítjuk, és a vizes oldatot 400 ml etil-acetáttal 4x extraháljuk. Az elválasztott etil-acetátos fázisokat vákuumban szá-azra pároljuk (0,7 g mélyvörös, szilárd haluazéllapotú maradék, B-frakció). b) 9,5 kg micéliumot aceton és 3,5 pH-jú acetátpuffer 10:1 arányú elegyének 50-50 literjével kétszer extrahálunk, az egyesitett exti aktumokat 12 liter térfogatra betöményítjük, a koncentrátumot 3x4 liter toluollal mossuk, a toluolos fázisokat egyesítjük és vákuumban mélyvörös olajos maradékká tömé-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
