195979. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antraciklin származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

27

195979

28

ós folyadék hozzáadása után meghatározzuk. Az eredményt a tesztanyaggal végzett inkubélás után mért szcintillációs indexként adjuk meg a kontroll százalékában (indexink.100). indexkon tr

Az így kapott értékekből a dózis-hatós-görbét vesszük fel, és grafikusan meghatározzuk az ICso-értéket, azaz azt a koncentrációt, amely a kisérleti körülmények között a rádióaktiv timidin beépítését a kontrolihoz viszonyítva 50%-kal csökkenti. A találmány szerint elkülönített vegyületek ICso-értékeit az 1. táblázatban adjuk meg (referencia: ADM=adriamicin).

b) L1210 leukémiasejtek telepeinek képződése lágy agaron

A módszerrel kimutatható, hogy van-e a tesztanyagoknak befolyása a sejtek több generáción keresztül figyelt növekedési viselkedésére (10-12 órás sejtciklusidő mellett a 7 napig tartó kísérlet során mintegy 14 egymást követő generáció figyelhető meg.)

Citosztatikusan hatékony anyagok a fenti tesztben a telepek számának csökkentését eredményezik, a kezeletlen kontrolihoz

hasonlítva. A tesztet az alábbiak szerint hajtjuk végre:

Lemezenként 500 leukémiasejtet a megvizsgálandó anyag különböző koncentrációban 5 37 °C-on 1 órán ót inkubálunk. Ezt követően

a sejteket McCoy5A-közeggel kétszer mossuk, majd 0,3%-os agar hozzáadása után Petri-csészébe öntjük. A kontrollt csupán friss közeggel inkubáljuk. Az egyórás inkubáció 10 helyett egyes esetekben a felső agarréteghez különböző koncentrációjú kísérleti hatóanyagot keverünk, hogy a teljes inkubációs időn ál a sejtek folyamatos exponálását érjük el. Miután az agar megdermedt, a lemezeket kel- 15 tető szekrényben 37 °C-on 7 napon keresztül (5% C02, 95% relatív páratartalom mellett) inkubáljuk. Utána megállapítjuk a kinőtt, 60 p-nél nagyobb átmérőjű telepek számát és a kezeletlen kontroll százalékában adjuk meg. 20 Az így kapott dózis-hatás-górbe alapján meghatározzuk az anyag hatékonyságára jellemző ICso értékét. A találmány szerint előállítható vegyületek eredményeit az 1. táblázatban adjuk meg, referenciaként adriamicint 25 használva.

1. táblázat

Hatóanyag

proliferációs teszt IC 50 (ug/ml)

telep 7 nap

növekedés

1 óra inkubáció IC 50 (jug/ml)

adriamicin

6.0xl0-3

2.2xl0-2

4.4x10-2

citorodin

B

2.8x10-3

3.4x10-3

1.2x10-3

~ i 1 “

A

1.1x10-3

3.0x10-3

1.3x10-3

G+I

2.8xl0-4

IC-4

2 xlO-3- | —

C

5.5xl0"4

1.5xl0-4

3.4x10-3- i 1 -D

2.8xl0-4

3.7x10-3

2.8x10-3- ■! -F

2.4x10-3

2.8x10 2

4.2xl0-2

— : i —

J

4.4--«)

~ l i ""

E

2.5xl0'2

1.4x10 3

2.8x10-2-íj-P

2.6x10-3

3.2x10 4

2.8x10-3

— j J ■—

V

2.9x10-3

2.7x10 4

2 xlO'3

— | j —

K

3.7x10-3

3 xlO'3

3.1x10-2

— 1 i —

L

3 xlO-1

2.1X10-1

1.75- h -M

2.8X10'1

1.6x10"1

3.9xl0-1- i i-N+O

5 xlO"3

2.5x10-3

4.5x10-2

*>nem vizsgált

15