195964. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oktahidro-indolizin-származékok és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
8 195964 9 átlátszó műanyag megfigyelő kamrába helyezzük, és 30 percen át feljegyezzük a rángá- Bok jelentkezését (a rángásokat az egérkí- BÓrletnél ismertetett módon definiáljuk). A rángások %-os gátlását (amely a %-os analgetikuB hatással egyenértékű) szintén a fent ismertetett módon számítjuk ki. A kontrollcsoport és minden egyes vizsgálandó vegyülettel kezelt csoport legalább 10 állatból áll. Az egyes dózis-hatás görbék és EDso értékek meghatározására minden vizsgálandó vegyületet 3-5 dózisban adagolunk. Az ED50 értékeket és a 95%-os megbízhatósági határt szintén a fent ismertetett módon határozzuk meg. Farok fájdalom-érzékelő vizsgálat (Tail Flick Assay) egéren/patkényon A vizsgálatot D'Amour és Smith [J. Pharmacol. Exp. Ther. 72, 74-79 (1941)] Vaught és Takemori [J. Pharmacol. Exp. Ther. 208, 86-90 (1979)] által módosított módszere szerint végezzük, az analgetikus hatáB meghatározására. Az állat (patkány vagy egér) farkát egy ITTC, Inc. Mod-33 Analgesia Meter által kibocsátott fókuszált fénysugár útjába helyezzük. Az állat a fénysugár által kiváltott fájdalom-ingerre farkának rándításával reagál, vagy farkát a fénysugár útjából elmozdítja. Az időmérőt és a fényt az állat fenti reagálásakor kézzel kikapcsoljuk. A reagálási időt feljegyezzük. A vizsgálandó vegyidet beadása után megfelelő idővel a fenti eljárási megismételjük, és a reagálási időket a gyógyszer beadása előtt mért reagálási időkkel összehasonlítjuk. Analgetikus hatásúnak tekintjük azt a vegyületet, amelynek alkalmazása esetén a reagálási idő a kontroll állatok reagálási idejének átlagánál több, mint három standard deviációval nagyobb, a csoport minden egyes tagja esetén. A dózis-hatás görbék meghatározását legalább három dózisból végezzük, dózisonként 10 állatot használunk. Az EDso értékek meghatározását (az állatok 50%-ában analgetikus hatást kiváltó dózist) és a 95%-ob megbízhatósági határok meghatározását SAS probit-analízissel végezzük. Forró lemez vizsgálat (Hot Plate Assay] egéren/pa t kanyon A vizsgálatot Vaught és Chipkin [Eur. J. Pharmacol. 79, 167-173 (1982)] és az abban foglalt irodalmi hivatkozások alapján végezzük. A forró lemezes készüléket (Technilab Instruments, Inc.) 48 ± 0,5 “C-on tartjuk, és mérjük azt az időt, amely az állatnak a meleg felületre való helyezése és a válasz-reakció (az állat nyalogatja vagy rézogatja a hátsó lábát) között telik el. A vizsgálandó vegyületet a kívánt módon beadjuk az állatnak, majd a megfelelő idő múlva újra meghatározzuk a reagálási időt. Az analgetikus hatás ismérvét, és az EDso érték, valamint a 95%-os megbízhatósági határ kiszámítását a Tail Flick módszernél ismertettük. A vizsgálatot hím, vírusmentes, 18-24 g-os Swiss CD-I egereken vagy hím, vírus-mentes, 90-210 g-os Wistar patkányokon (Charles River tenyészet) végezzük. Az állatoknak ad libitum adjuk az élelmet és a vizet, és azokat csak egyszer használjuk a kísérletek során. A fent ismertetett acetil-kolinos vizsgálatban egéren a 20e. példa szerint előállított vegyűlet ED50 értéke p.o. adagolás esetén közel 3,5 mg/testtömeg kg; a 10. példa szerint előállított vegyületé közel 22,4 mg/kg, p.o.; és az lb. példa szerinti vegyületé közel 20 mg/kg, p.o.. A levegővel indukált rángási vizsgálatban egéren a 26. példa szerint előállított vegyűlet EDso értéke közel 19,1 mg/kg, p.o.; és az lb. példa szerinti vegyületé közel 48,6 mg/kg, p.o.. A Tail Flick vizsgálatban az 1. példa szerint előállított vegyűlet EDso értéke különböző vizsgálatokban 27 és 44 mg/kg között van, i.p. adagolás esetén, egéren. A Hot Plate vizsgálatban az lb. példa szerint előállított vegyűlet EDso értéke különböző vizsgálatokban 27 és 35 mg/kg között van, i.p. adagolás esetén, míg a 26. példa szerinti vegyületé közel 16,5 mg/kg, i.p., egéren. A vizsgálatot patkányon végezve a 10. példa szerinti vegyűlet EDso értéke közel 22,0 mg/kg, i.p. adagolás esetén. A fenti eredmények alapján megállapítható, hogy a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek gyógyszerkészítmények hatóanyagaként melegvérű állatok, így az ember esetén is alkalmasak enyhe - közepes erősségű fájdalmak enyhítésére, hatásuk a meperidin-hidrogén-kloridéval mérhető össze. Az analgetikus hatás kifejtéséhez szükséges dózis nagysága közel 10 és 3000 mg, közelebbről 25 és 1000 mg, vagy közel 100 és 500 mg között változhat, átlagosan testtömegű (70 kg-os) felnőtt esetén, napi 1-4 alkalmazás mellett. A dózis nagyságát természetesen az enyhíteni kívánt fájdalom nagysága szabja meg pontosabban, továbbá a hatóanyag aktivitása. A találmány szerinti eljárás értelmében a gyógyászati készítményeket úgy állítjuk elő, hogy legalább egy (I) általános képletű hatóanyagot vagy annak valamely sóját a gyógyszerkészítésben szokásosan alkalmazott hordozó- vagy egyéb segédanyagokkal öszszekeverjük, majd a szokásos módon gyógyszerkészítménnyé formáljuk. Hordozóanyagként a kívánt alkalmazási módtól függően számos anyagot használhatunk. Az orális alkalmazásra szánt gyógyszerkészítményekben hordozóanyagként bármely, a gyógyszerkészitésben szokásosan használt hordozóanyagot használhatunk. Cseppfolyós orális készítmények - például szuszpenziók, elixirek vagy oldatok - készítésére hordozóanyagként és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
