195858. lajstromszámú szabadalom • Eljárás teicoplanin A2 komplex egyes fő komponenseinek szelektív feldúsítására
3 195358 4 A találmány tárgya eljárás a T-A2 egyes fő komponensei arányának szelektív növelésére a T-A2 komplexben. A teicoplanin (régebbi nevén teichomycin) egy, az Actinoplanes teichomycelicus nov. ap. ATCC 31121 tenyészetből előállított glikopeptid antibiotikum, mely elsősorban a Gram-pozitiv baktériumok ellen alkalmazható hatásosan. Az egyesült államokbeli 4 239 751 számú szabadalmi leírásban található eljárás szerint a teicoplanint a termelő tenyészet fermentációs levéből egy háromkomponensű komplex alakjában nyerik ki, melynek összetevőit Ai-nek, A2-nek ill, As-nak nevezik. A fenti tenyészetek fermentálásával nyert antibiotikum-komplex túlnyomó részben A2 komponensből áll, mely a komplex biológiai hatása szempontjából a legfontosabb összetevő. Az Ai és A3 komponens csak igen kis mennyiségben van jelen. Az egyesült államokbeli 4 239 751 számú szabadalmi leírás szerint a teicoplanin Aa-t (T-A2) a teicoplanin komplex egyéb komponenseitől oszlopkromatográfiás módszerrel választják el. Az eljáráshoz Sephadex Rl.H-20 töltetet használnak, mely egy térhálós polidextrán gól hidroxi-propil-származéka, és kiszűrési hatéra 4000-es molekulatömeg körül van. Üzemi méretű gyártási és tisztítási eljárásokkal (ezeknek egyik példája megtalálható s 0122969 számú európai szabadalmi leírásban általában olyan teichomyc.in-lerméket állítanak elő, mely kis mennyiségű leichoplanin A3 mellett főleg teichoplanin A2-ből áll. Ez a termék gyógyászati felhasználásra alkalmas (lásd: Drugs of the Future: Vol. 9, No. 6, 1984, p.: 429-430, kiadó: J. R. Prous Publishers, Barcelona, Spanyolország). Egy közlemény szerint (A. Borghi, C. Coronelli et al., Journal of Antibiotics, Vol. 37, No. 6, pp. 615-620, June 1984) a teicoplanin A2 komponense (a T-A2) viszont öt fő komponens keveréke, melyek polaritás tekintetében nagyon közel állnak egymáshoz. Ezeket a komponenseket (melyeknek jelzése T-A2-1, T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 ill. T-A2-5), első lépésben fordított fázisú megoszlásos kromatográfiával választották el, amit normál légköri nyomás alatt, szilánozott szilikagél oszlopon hajtottak végre. A T-A2- -3, T-A2-4, T-A2-5 komponensek tisztítása egy további lépést igényelt, melyben szemi-proparativ, nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárást alkalmazlak, Whatman Partisii "ODS M-9 oszlopon, eluensként pedig 76 : 24 arányú ammónium-formiát : acetonitril elegy 0,2%-os vizes oldatát használták. A közlemény az összes említett komponens kémiai és biológiai jellemzését megadja (lásd még a 2 121 401 számú brit szabadalmi leírást). A J. C. J. Barna, D. M. Williams et al. által közölt szerkezetvizsgálatok (J. Am. Chem. Soc. 1984, 106, 4895-4902) azt mutatják, hogy a teicoplanin A2 fő komponensei az (!) általános képlettel írhatók le, nhol R jelentése (a) általános képletű csoport, R’ jelentése a T-A2-1 komponensben (b) általános képletű (Z)-4-decenoil-csoport, a T-A2-2 komponensben (c) általános képletű 8-metil-nonanoil-csoport, a T-A2-3 komponensben (d) általános képlel ü n-dekanoil-csoport, a T-A2-4 komponensben (e) általános képletű 8-metil— -dekanoil-csoport, a T-A2-5 komponensben pedig (f) általános képletű 9-metil- deka noil-csoport. A fenti 2 121 401 számú brit szabadalmi leírásban ismertetett in vitro és in vivo vizsgálatok azt mutatják, hogy a T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 és T-A2-5 komponensek mindegyike hatásosabb, mint az A2 komplex egészében véve. Ezért nyilvánvaló, hogy a teicoplanin ipari méretű előállításában minden olyan módszer célszerűen alkalmazható, mely a teicop’anin A2 bármely fő komponensének képződését szelektíven előmozdítja. Fontos műszaki előnyt jelent, hogy e módszerek vonatkozhatnak a T-A2 egyedi komponenseinek t szta alakban történő izolálására, vagy pedig a hatásosabb komponensekben feldúsított T-A2 komplex előállítására. Ezen túlmenően, ha az ipari méretű fermentálás során módosítani tudjuk a T-A2 komplex egyes fökomponenseinek arányát, ez az eszköz jól használható arra, hogy a fermentációs termék összetételét állundó - és a szabvány-elöirásoknrk megfelelő - értéken tartsuk. Ez azt jelen! i, hogy ha az egyes komponensek %-os aránya bármilyen okból (pl. az ipari tenyészet közegének megváltoztatása olcsóbb anyagok felhasználása céljából) eltávolodik a szabvány szerinti értéktől, akkor ezen hiba korrigálására hasznos eszközt nyújt az a lehetőség, hogy a T-A2 valamely fő komponensének arányát szelektíve megnövelhetjük. A találmány tárgya eljárás az egyes T-A2 fókomponensek arányának szelektív növelésére a T-A2 komplexben. A találmány tárgya közelebbről eljárás a T-A2-1, A-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 vagy T-A2-5 főkomponensek bármelyikében szelektíve feldúsított teicoplanin A2 előállításéra, mely abból áll, hogy egy Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 vagy annak valamely olyan mutánsának tenyészetéhez, mely azonos metabolikui úton T-A2 komplexet állít elő, a T-A2 egyik glükoz-amin részéhez kapcsolódó jellemző acilc.soport (lásd az R' fenti jelentéseit) megfelelő prekurzorából szelektíve hatásos mennyiséget adunk hozz.á. A prekurzorra a továbbiakban így hivatkozunk: „a T-A2 glükoz-amin részéhez kapcsolódó jellemző acilcsoport megfelelő prekurzora". A találmány szerinti eljárást az jellemzi, hogy a) a T-A2 komplexben a T-A2-1 komponens arányának növelésére megfelelő prekur-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
