195786. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 5-helyettesített-6-amino-pirimidin-származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

19

195786

20

14. példa

15. pálda

6-[ (Ciklopropil-metil)-amino]-2-meI il-5- -(l-metil-etil)-4-pirimidinol

KnrdiolóisiÚB aktivitási teszt macska izolált papillús izmában

7,24 g (67,0 mmól, 5 ekvivalens) amino-metil-ciklopropán-hidroklorid 2,5 ml víz7,el készült oldata és 3,75 g (67,0 nimól) kálium-hidroxid elegyét 8 g kálium-hidroxiddal szárítjuk, 5x3 ml THF-vel öblítjük. A THF öblítéseket egymás utón egy vízmentes kálium-karbonát szűrőn átszűrjük egy lombikba, amely 2,5 g (13,4 mmól) 2-metil-5-( 1-metil-etil)-6-klór-4-pirimidinolt tartalmaz. A lombikot lezárjuk és a reakcióelegyet 65 óra hosszat 100 °C-on keverjük. A kapott tiszta sárga elegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot gyorB kromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 50 ml-es oszlop, eluálószer etil-acetát, a kevert frakciót újra kromalografálva), így 850 mg (4,55 mmól, 34%) kiinduló anyagot nyerünk vissza, az etil-acetátból álkristályosítva pedig 1,51 g (6,82 mmól, 51%) tiszta terméket kapunk, o.p.: 167-168 "0.

'H NMR-spektrum (200 MHz, CDb): 5 13,2 (br s, 1H), 4,68 (br s, 111), 3,31 <dd, J = 7,2 5,3 Hz, 2H), 3,04 (ra, 1H), 2,31 (s, 3H), 1,29 (d, J = 7,2 Hz, 611), 1,08 (m, 1H),

0,54 (m, 2H), 0,25 (m,

2H);

IR-spektrum (KBr):

UV-spektrum (MeOH):

Tömeg-spektrum:

Elemanalízis a C12H19N3O C (X)

számított: 65,13

talált: 64,91

3485 (NH), 2800--3000 (CH), 1620,

1575 (C=0, C=N)

cm"1;

X 273,0 (e 10 210), 222,0 (e 2.1 440); m/e 221 (M\ 100%), 192 (M'-Cslls, 73%); képletre:

H (%) N (%)

8,65 18,99

8,52 18,88

10

15

20

25

30

35

40

45

Macskát (bármilyen neműt) Na-penlobarbital 25-30 mg/kg mennyiségével anesztetizállunk. A szivet gyorsan kiemeltük, és hideg Tyrode-féle oldatba helyeztük, amelyet előzőleg 95% oxigén és 5% szén-dioxid tartalmú gázelegg.yel kiegyenlítettünk. A jobb kamrát megnyitottuk az oldalak és a csúcs levágásával úgy, hogy a szabad falat vissza lehessen hajtani a pitvar-kamra barázdára. Általában legalább három alkalmas méretű papillás izom (1 mm vagy kisebb vastagságú) található itt. Fonalat kötöztünk az ínszalagra ds az izom végére közvetlenül azon pont fölé, ahol a kamra falába illeszkedik. A szalagokat levágtuk, és az izmot a kamra falának egy kis részével együtt kiemeltük. Ha nincs elég papillás izom, akkor izomgerenda is használható. A legjobbak közvetlenül a billentyű alatt találhatók.

A preparátumot 37 °C-os szövetfűrdőbe helyeztük, amely Tyrode-féle oldatot tartalmazott, és amelyen 95% oxigént és 5% szén-dioxidot tartalmazó gázelegyet buborékoltatlunk át. A_ preparátumra alkalmazott kezdeti tenzió 0,2 g volt (nagyon kicsi izmoknál kevesebb). A preparátumot 2-4 msec időtartamú és 10% küszöbértékű 0,5 Hz-es szögletes hulláin impulzusokkal stimuláltuk. Az izmokat ezután óvatosan és fokozatosan kinyújtottuk optimális feszültségi hosszukig (ahol a rántási tenzió maximális - további nyújtás már nem eredményezi a rántás hosszirányú méretének fokozódását). A preparátumot ezután 1 óra hosszat hagytuk kiegyenlítődni, mialatt 10-15 percenként kicseréltük a fürdőt. A teszt-vegyületeket 0,1 ml vivőanyaggal adtuk a fürdőhöz, és 15 percig vagy amíg a csúcshatás meg nem jelent, inkubáltuk.

A módszerrel a következő, (1) általános képletü vegyületek mutatkoztak hatásosnak a papillás izom összehúzódási erejének fokozásában.

1. táblázat

Kardiotóniás aktivitási teszteredmények macska izolált papillás izmában

Vegyület (példa száma)

EC50

1.

2,5 x 10-« mól/1

2.

2,9 x 10"6

mól/1

3.

1,0 x 10-6 mól/1

4.

1,5 x 10-6

mól/1

5.

1,1 x 10~6 mól/1

6.

(69%

emelkedés 10-4 mól/1-7.

7,4 x 10‘6

mól/1

8.

(52%

emelkedés 10"4 mól/1 -9.

1,3 x IO'5

mól/1

10.

2,5 x IO-4

mól/1

11