195784. lajstromszámú szabadalom • Eljárás arfamenin-származékok és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
5 195784 6 2) A sejt által közvetített immunitásra kifejtett hatás vizsgálata A találmány szerinti vegyületeknek a sejt által közvetített immunitásra gyakorolt hatását a .késletetett típusú hiperérzékeny- 5 ség’ (D.T.H.) alapján értékeltük ki. Ez a hiperérzékenység akkor lép fel egereken, ha talpukba antigénként birkák vörösvérsejtjeit oltjuk be. E vizsgálatot a következő módon végeztük: 10® birka-vörösvérsejt 0,05 ml fi- 10 ziológiás sóoldattal készült szuszpenzióját szubkutón úton CDFi egerek egyik lábának a talpába fecskendeztük. A kísérlet céljára 8 hetes nőstény egereket alkalmaztunk, és minden egyes csoportba 5 állatot osztottunk. Ezzel egyidöben a kísérleti egerekbe a vizsgálandó vegyületet 5 mg/kg, 0,5 mg/kg, illetve 0,05 mg/kg mennyiségben orálisan adagoltuk olyan módon készített oldatban, hogy a vizsgálandó vegyületet fiziológiás konyhasóoldatban oldottuk, és az így kapott oldatot Millipore-szürőn megszűrtük. A vizsgálandó vegyület beadása után 4 nappal minden egyes kísérleti állatnak a másik talpába szubkután úton 10® birka-vörösvérsejtet adagoltunk, majd 24 óra után a talpuk vastagságát tolómércével megmértük a kiértékelés végett. Vizsgálati eredményeinket az alábbi 2. táblázatban összegeztük. 2. táblázat A találmány szerinti vegyületek hatása a birka-vörösvérsejtekkel előidézett, késleltetett típusú hiperérzékenységi válasz kifejlődésére Vegyület Adag mg/kg A duzzadás mértéke a kontrolihoz viszonyítva (X) az 1. példa szerinti vegyület 5,00 128* 0,50 121 0,05 107 a 2. példa szerinti vegyület 5,00 144* 0,50 130* 0,05 113 a 3. példa szerinti vegyület 5,00 136* 0,50 120 0,05 110 a 4. példa szerinti vegyület 5,00 145* 0,50 123* 0,05 101 = P < 0,05 Az 1., 2., 3. és 4. példákban leírt vegyületek (végtermékek) toxicitását a következőképpen állapítottuk meg. Ha 100 mg/kg vizsgálandó vegyületet intraperitoneális úton 5 hetes, 20 g testtöme- 15 gű hím ICR-törzsü egereknek adagoltunk, a kísérleti állatok között pusztulást nem tapasztaltunk. A fentebb ismertetett megfigyelések világosan mutatják, hogy a találmány szerinti, 50 arfamenin-rokon vegyületeket kis adagban növelik a sejttel közvetített immunitást. A találmány szerinti vegyületeknek ez az erős immunpotencirozó hatása arra utal, hogy ezek a vegyületek széles körben felhasznál- 55 hatók daganatok immunterápiás kezelésére, valamint fertőzések megelőzésére. A találmány szerinti arfamenin-rokon vegyületek bármilyen orális, injekció vagy rektális (végbélkúp) készítmény alakjában 60 adagolhatok immunpotencirozó szerekként. E készítmények úgy formulázhatók, hogy a hatóanyagokat különböző típusú pH-beállitó, stabilizálószerekkel, valamint vivőanyagokkal keverjük. Az arfamenin-rokon \együletek 65 adagja a betegség körülményeitől függ: szokásos adagja orális adagolás és felnőtt egyének esetében naponta 50 mg-tól 200 mg-ig terjedhet. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 1. példa 2-Benzil-5-(bezoil-amino)-8-[(4,6-dimetil-2-pirimidinil)-amino]-4-oxo-oktánsav előállítása a/ lépés: 2-Benzil-5-(benzoíl-amino)-8- -guanidino-4-oxo-oktánsav előállítása 200 mg arfamenin-A hidroklorid 1 ml vízzel készült oldatához 98 pl benzoil-kloí'idot és 119 mg nátrium-karbonátot adagolunk 5 egyenlő részletben, 30 perces időközökben jéghűtés és keverés közben. A reakció befejeződése után az elegy pH-értékét 1 n sósavoldattal 7,0-re állítjuk, majd étert adunk hozzá. Az így kapott csapadékot vízzel mossuk és szárítjuk. így 225 mg hozamul
