195734. lajstromszámú szabadalom • Eljárás herpes simplex vírus elleni védőanyagok előállítására
31 195734 32 5. TÁBLÁZAT A murádéi ok szúrna Feliérje (26) (27) (28) 1 2 3 gD-1 (jósolt) lys tyr ala gD-1 ( Edman-lebontás) lys tyr ala gD-2 ( Edman-lebontás) lys tyr ala (36) (37) (38) 11 12 13 gD-1 (jósolt) met ala asp gD-1 ( Edman-lebontás) met ala X gD-2 (Edman-lebontás) met ala X (46) (47) (48) 21 22 23 gD-1 (jósolt) asp leu pro gD-1 (Edman-lebontás) X leu X gD-2 (Edman-lebontás) X X leu x - nem határoztuk meg a - az eredmény kérdéses A lebontás adatai azt mutatják, hogy mindkét glikoproteid N-termiálisán lévő antinosav lizin. A gD-1 és gD-2 mctionin-, arginin-, leucin- és alanin-profiljúban különliségek figyelhetők meg. Ezen esetek mindegyikében azonban több mai-adók volt jelen mindkét glikoproteidben, és egy vagy több maradék volt jelen az egyikben és hiányzott a másikban. Így például az alunin esetében azt találtuk, hogy mindkét fehérje alanint tartalmaz a 3-as, 5-ös és 12-es helyzetekben; azonban csak a gD-1 tartalmaz alanint a 2-es helyzetben. Mindkét fehérje metionint tartalmaz a 11-es helyzetben, de csak a gD-1 tar- ^ talmaz metíoninmaradékot a 8-as helyzetben. Mindkét fehérje arginint tartalmaz a lG-os és 18-as helyzetben, és csak a gD-2 tartalmaz arginint (inkább, mint lizint) a 20-as helyzetben. A leucin esetében radioaktiv csúcsok ^ jelentkeztek a gD-1 4-es, 9-es, 22-es, 25-ös és 28-as maradékainál. A gD-2 esetében 3H-leucin csúcsok voltak a 4-es, 23-as és 28-as maradékoknál és esetleg a 25-ös maradéknál. Meg kell jegyeznünk, hogy a leucin-profilok mindkét feliét •je esetében erősen radioaktív háttérrel jelentkeztek. Ez valószínűleg annak az igen hosszú jelzési időnek a következménye, amely ahhoz szükséges, hogy ezt a különleges aminosav-jelölést kielégítően beágyazzuk. Ezzel szemben a gl)-l esetében a 3H-leucin csúcsok pontos korrelációban vannak a Watson és munkatársai által levezetett auiinosavszekveneiában a leucin helyeivel. Az 5. táblázat mutatja, hogy a gD-l-re çq fentebb jelzett adatok jól összehangolhatok a gD-1 le vezetett aminosavszekvencíá javul, amely a levezetett szekvencia 2G-os maradékánál kezdődik. Különbség figyelhető meg a 8-us maradéknál (levezetett szekvencia 33-as grj (29) (30) (31) (32) (33) (34) (35) 4 5 6 7 8 9 10 leu ala asp ala ser leu lys leu ala X ala met leu lys leu ala X X X X lys (39) (40) (41) (42) (43) (44) (45) 14 15 16 17 18 19 20 pro asn arg phe arg giy lys X X arg X arg X lys X X arg X arg X arg (49) (50) (51) (52) (53) (54) (55) 24 25 26 27 28 29 30 val leu asp gin leu thr asp K leu X X leu X X X leuB X X leu X X maradéka), ahol a fentebbi adatok azt mutatják, hogy a gD-1 (HF törzs) metionin-maradékot tartalmat. A gD-2 (SAVAGE törzs) ilyen maradékot nem tartalmaz. A nukleinsavszekvencia elemzése alapján jósolt maradék (IISV-1 Patton törzs alkalmazásával) szerin. Az e helyzetben megfigyelt különbségek a törzs és típus változásának következményei lehetlek. A metionról szerinre való változás azonban legalább két bázis változását igényelné. Az adatok azt mutatják, hogy a Watson és munkatársai által jósolt szekvencia első 25 aminosavmaradéka a fertőzött sejtekből elkülönített fehérjében nincsen jelen. Az aminosavaknak ez a szakasza erősen hidrofób, ez alól csak az arginin - jósolt helyzete a 7-es és 24-es - és a hisztidin - a jósolt helyzete a 21-es - kivétel. A fenti adatok valószínűsítik, hogy a gD-1 valóban szignál peptiddel rendelkezik, és ez 25 aminosavat tartalmazhat. Mivel úgy találtuk, hogy mind a gD-1, mind a gD-2 lízin-maradékkal kezdődik, valószínűnek látszik, hogy a gD-2 DNS-ről ki fog tűnni, hogy egy szignál peptidet kódoló területet tartalmaz. A gD-1 szekvencia analízise céljából 2" •3H-mannózt és 35S-ciszteint is felhasználtunk a radioaktív jelzésre. E jelzések esetében az első 30 maradékban nem észleltünk radioaktivitást. A Watson és munkatársai által a gD-l-re levezetett aminosavszekvencia szerint az első cisztein a 66-os maradéknál és az első aszpuragiu - amelynek szekvenciája megfelelő (Asn-x-Thr vagy Ser) - mint glikozilezési hely a 94-es maradéknál várható. így a jelen vizsgálat negatív adatai korrelációban varnak a gD-1 szekvenciájából jósolható adatokkal. A jósolt aminosavszekvencia érdekes sajátsága, hogy az N-végződéshez közel egy 17
