195724. lajstromszámú szabadalom • Hatóanyagként új C-patotítusú Bacillus thuringiensis törzset, vagy az általa termelt toxint tartalmazó inszekticid készítmény és eljárás a hatóanyag előállítására
6 19572-1 I Az 1. példa szerint kapott primer termék (üledék a tenyészet szuszpenziójának 30 perces, 5000 g-nál végzett centrifugésa után (fagyasztva száritást követően kb. 3xl08 spóraekvivalenst tartalmazott liofilizátum mg-onként. A dózisfüggő hatás vizsgálatéra 5 burgonya-hajtásokat mártottunk a C-patotipusú Bacillus thuringiensis (DSM 2803) vizes szuszpenziójába és száradás után meghatározott stádium burgonyabogárral (Li, L2, L3 és L4) népesítettük be. Az a) 10®, b) 107, c) 10 10s és d) 109 spóraekvivalens/ml koncentrációsort teszteltük. 0,025 % Citowett (alkil-aril-poliglikoléter bázisú nedvesitőszert, BASF, Ludwigshafen/Rhein, NSZK) hozzáadásával javítottuk a szuszpenziók nedvesítőké- 15 pességét. 3xl08 spóraekvivalens/mg liofilizátum alapul vételével az inszekticid készítmény összetétele a kővetkezőképpen alakult: a) 0,0003 tömegszázalék aktív hatóanyag, 0,025 tömegszázalék nedvesitőszer és a 20 maradék víz; b) 0,003 tömegszázalék aktív hatóanyag, 0,025 tömegszázalék nedvesítőszer és a maradék víz; c) 0,03 tömegszázalék aktív hatóanyag, 25 0,025 tömegszázalék nedvesitőszer és a maradék víz; d) 0,3 tömegszázalék aktív hatóanyag, 0,025 tömegszázalék nedvesitőszer és a maradék víz. 30 A kontroll burgonya-hajtásait csak olyan nedvesitőszer-oldatba mártottuk, amely 0,025 tömegszázalék Citowett-et és a fennmaradó mennyiségben vizet tartalmazott. Az állatok száma kísérletenként 30 volt. 35 A kísérleti hőmérséklet körülbelül 30~°C volt. A kiértékelés szempontjából mértékadónak a végső mortalitást tekintettük. Ennek során a következő értékek adódtak: Li: LCsoSxlO6 spóraekvivalens/ml 40 L2: LCsolxlO7 spóraekvivalens/ml L3: LCmSxIO7 spóraekvivalens/ml L4: LCso >109 spóraekvivalens/ml Szabadföldi kísérlet számára 10B spóraekvivalens/ml permetezöszert készítettünk, 45 ami megfelel kb. 0,03 tömegszázalék aktív hatóanyagnak, 0,025 tömegszázalék Citowett-nek, a maradék víz volt. A készítményt hordozható sűrített levegővel működő permetezőkészülékkel permeteztük ki. Az eredmények 50 ellenőrzésére meghatároztuk a három vagy több lárvát tartalmazó növények számát. A felhasznált mennyiség 500 liter volt hektáronként, vagyis 5xl09 spóraekvivalens négyzetméterenként. Az 1. ábra szemlélteti a 4 55 kísérleti variáns eredményeit. Az 1. jelölési változat a kezeletlen kontrollt szemlélteti. A 2. jelölésű változatban rendszeresen, körülbelül 14 napos időközökben 5x10® spóraekvivalens/m2 dózist perme- 60 teztünk ki. A 3. jelölésű változatban rendszeresen, minden két hétben 5xl010 spói'aekvivalens/m2-! permeteztünk ki. A 4. jelölési változatban először 5x) 09 spóraekvivalens/ /m2-t alkalmaztunk. Ezután az adagot 2,5xxlO11 spóraekvivalens/m2 értékre növeltük és ezután már csak egy kezelést alkalmaztunk, amennyiben a növények legalább 10/C-át legalább 3 lárva lepte el. Összesen csupán 4 permetezés volt szükséges, mig a 2. és 3. jelölésű változatban 6 permetezést végeztünk.A kipermetezett aktív hatóanyag összmennyisége a 2. jelölésű változatban 7,5xl()10 spóraekvivalens/m2, a 3. jelölésű változatban 2,1x1c11 spóraekvivalens/m2 és a 4. jelölésű változatban 7,Gxl011 spóraekvivalens/m2 volt Az 1. ábrából az is kitűnik, hogy a fertőzöttség a kezeletlen kontroliban július végéig megközelítőleg azonos volt. Augusztus kezdetén jelentős növekedés következett be, amit vélhetően a lárvák 2. generációja határozott meg. A fertözöttség a kezelt parcellákban jóval a kezeletlen kontrolié alatt volt. Már egy 5xl09 spóraekvivalens/m2 dózis elegendő ahhoz, hogy a fertözöttséget a kezeletlen kontrolihoz képest - 17%-ra csökkentsük. A 4. jelölésű változat azt szemlélteti, hogy kezelések takaríthatok meg, amennyiben nagyobb dózist alkalmazunk. Gazdaságosság kérdése, hogy’ ezt az utat választjuk-e. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás C-patotipusú, fedelesszárnyúak (Coleoptera) ellen hatásos toxint tartalmazó Bacillus thuringiensis sejtkészitmény és a C-patotipusú toxin előállítására, azzal jellemezve, hogy C-patotípusu Bacillus thuringiensist szén-és nitrogénforrásokat tartalmazó tápközegben tenyésztünk, a tenyészetből a sejttömeget kinyerjük, és a spontán lizált keverékből a kristályokat a spóra- és egy’éb sejtmaradékoktól elkülönítjük és az így kapott kristálytömeget tisztítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy C-patoLipusú Bacillus thuringiensisként a DSM 2803 letéti számú törzset tenyésztjük. 3. Inszekticid készítmény Coleoptera ellen, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként 0,001-95 tömegszázalék előnyösen 0,003-60 tömegszázalék C-patotipusű Bacillus thuringiensist vagy ebből előállítható toxint, és 5-99,999 tömegszázalék adalékanyagot, úgymint szilárd, inei-t szervetlen vagy szerves hordozóanyagot, folyékony szuszpendáló- emulgeáló- vagy oldószert és/vagy nedvesítő, szétterülést elősegítő és/vagy tapadást elősegítő szert, előnyösen 99,987-39,99 tömegszázalék vizet és 0,01-1 tömegszázalék nedvesítőszert, előnyösen alkil-aril-poliglikoléter bázisút tartalmaz. 4. A 3. igénypont szerinti Coleoptera elleni inszekticid készítmény, azzal jellemezve, hogy’ a hatóanyag olyan C-patotipusú Bacillus thuringiensis, melynek letéti száma DSM 2803,vagy az ebből nyerhető toxin. 1 rajz A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Kon; v kiadó igazgatója 88.930.66-4 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: íö nkö István ucBJ igazgató 5
