195540. lajstromszámú szabadalom • Eljárás G- és V-penicillin előállítására fermentációs úton
1 195 540 2 teljes lefutása alatt folyamatos adagolással a fenilecetsav koncentrációját 0,05-0,08 t.% értékek között tartottuk. A pH szabályzására ammóniumszulfát, ammóniumhidroxid és káliumhidroxid oldatokat alkalmaztunk, úgy adagolva a fenti anyagokat, hogy a pH 6,2-6,9; az oldott nitrogén tartalom 0-105 órás korban 75-20 nig/100 ml értékek között maradjon. Az oldott nitrogéntartnlom meghatározására RADELKIS OP-264/1 ammónia és pH mérőt alkalmaztunk. A fenilecetsav meghatározása Hewlett Packard 1084 B magasnyomású folyadékkromatográffal történt. [Chromatographia Vol. 12. No. 6, June 1979(380-385).] A fentiekben jellemzett eljárás kivitelezésére alkalmazott fermentor teljes kapacitása 1150 liter, hasznos kapacitása 850 liter volt. Eljárásunkkal a fentiek szerint nyert adatok alapján számítva: 1 m3 teljes fermentortérfogatban 1 hónap alatt 68,2 kg G-penicillin-K-só volt bioszintctizálható. I A penicillintartalom meghatározása Hewlett Packard 1084 B magasnyomású folyadékkromatográffal történt. A kinyert termék hatóanyagtartalma: 98,8% (HPLC). Op.: 212-215 6C (bomlik). 1 kg penicillin bioszintetizálásához 7,99 kg szaharózt, 0,95 kg ammóniumszulfátot, 0,47 kg fenilecetsavat, 0,73 kg kukoricalekvárt (100%), 1,83 kg (földi) mogyorólisztet használtunk fel. 2. példa A BIOGAL Gyógyszergyár tulajdonában lévő ipari termelésre alkalmazott URC M jelzésű Pénicillium chrysogenum törzsből (deponálási szám: MNG-00 237) 80 liter előfermentációt készítettünk. Az előfermentációt 630 liter alqptáptalajba oltottuk, melynek összetétele a következő volt: (földi) mogyoróliszt 2,5 t.% kukoricalekvár (100% szárazanyagtartalomra) 1,0 t.% nátriumtioszulfát 0,06 t;% kalciumkarbonát 0,78 t.% fenoxiecetsav 0,56 t.% A fermentációs paraméterek a következők voltak: felhasznált energia 800 liter • fermentlé térfogatnál mérve 2,6 kW/m3 hőmérséklet 25 °C belső nyomás 105 Pa levegőztetés 1 Nm3/1 m3 f.lé/perc A fermentációt 120 órán át futtattuk. Ezalatt összesen 10,5 tömeg % szénforrást adagoltunk a tenyészethez, a szénforrás 7 t.%-a napraforgóolaj, 93 t.%-a szaharóz volt. A fermentáció 56 órás korától a fermentáció teljes lefutása alatt folyamatosan fenoxiecetsav oldatot adagoltunk. Az adagolást olyan ütemben végeztük, hogy a fenoxiecetsav koncentrációja 0,20-0,05 t.% értékek között maradjon. A pH szabályzására ammóniumszulfát, ammóniumhidroxid és káliumhidroxid oldatokat alkalmaztunk, úgy adagolva a fenti anyagokat, hogy a pH 6,2-6,9, az oldott nitrogéntartalom 0—105 órás korban 75-20 mg/100 ml értékek között maradjon. A fentiekben jellemzett eljárás kivitelezésére alkalmazott fermentor teljes kapacitása 1150 liter, hasznos kapacitása 850 liter volt. , Eljárásunkkal a fentiek szerint nyert adatok alapján számítva: 1 m3 teljes fermentortérfogatban 1 hónap alatt 76,0 kg V-pcnicillin-K-só volt bioszintctizálható. A kinyert termék hatóanyagtartalma (HPLC): 99,1 %. [a]p = + 220° (c = 0,2 vízben). 1 kg penicillin bioszintetizálásához: 6,90 kg szaharózt, 0,82 kg ammóniumszulfátot, 0,63 kg fenoxiecetsavat, 0,65 kg kukoricalckvárt (100%), 1,64 kg (földi) mogyorólisztct használtunk fel. 3. példa A BIOGAL Gyógyszergyár tulajdonában lévő ipari termelésre alkalmazott URC M jelzésű Pénicillium chrysogenum törzsből (deponálási szám: MNG-00237) 80 liter előfermentációt készítettünk. Az előfermentációt 720 liter alaptáptalajba oltottuk, melynek összetétele a következő volt: (földi) mogyoróliszt 1,0 t.% kukoricalekvár (100% szárazanyagtartalomra) 2,5 t.% nátriumtioszulfát 0,1751.% kalciumkarbonát 0,681.% napraforgóolaj 0,25 t.% A fermentációs paraméterek a következők voltak: felhasznált energia 800 liter fermentlé térfogatnál mérve 2,6 kW/m3 hőmérséklet 25 °C belső nyomás 10s Pa levegőztetés 1 Nm3/1 m3 f.lé/perc A fermentáció 10 órás korában 0,06 t.% fenilecetsav oldatot adagoltunk a ferm'entléhez, majd a fermentáció teljes lefutása alatt folyamatos adagolással a fenilecetsavkoncentrációt 0,05—0,08 t.% értékek között tartottuk. A pH szabályzására ammóniumszulfát, ammóniumhidroxid és káliumhidroxid oldatokat alkalmaztunk, úgy adagolva a fenti anyagokat, hogy à pH 6,2-7,0 értéken legyen, ugyanakkor az oldott nitrogéntartalom minimum 20 mg/100 ml értéket érjen el. Szénforrásként a tenyészethez 50 t.%-os szaharóz oldatot és napraforgóolajat adagoltunk. A napraforgóolaj adagolása olyan ütemben történt, hogy a tenyészet térfogata a levegőztetés nélküli térfogatot mintegy 15-25%-kal haladja meg. A szaharóz és napraforgóolaj együttes adagolási ütemét úgy választottuk meg, hogy a fermentáció alatt a nedves sejttérfogat (PCV) érték 38-44 t.% között legyen. A nedves sejttérfogat mérésére JANETZKY T-32 típusú centrifugát alkalmaztunk (g :500). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3