195538. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunstimuláns hatású acil-glikoproteinek előállítására klebsiella pneumoniae sejtekből
1 195 538 2 Abban az esetben, ha üreges szál formájában lévő membránt használunk, a koncentrálást előnyösen két kezelési ciklusban hajtjuk végre, az úgynevezett bemosási módszerrel, amely abból áll, hogy a szűrőkamrában a kis molekulák és oldószer kiáramlásából származó veszteséget oldószer — a jelen találmány esetében víz — bevitelével kompenzáljuk. A koncentrálást a kiindulási koncentráció ötszörösének megfelelő értékéig kívánatos folytatni. A kapott oldatot a továbbiakban hidegen — körülbelül + 4 °C-on — kis molekulatömegü alkanollal — például metanollal, etanollal, n-propanollal vagy izopropanollal— kezeljük. Előnyösen etanólt használunk. Legkedvezőbb eredményt akkor kapunk, ha 1 térfogat sóoldatot 6 térfogat etanollal egy éjszakán át +4 °C-on kezelünk. A csapadék elválasztását egyféle módszerrel, vagy több módszer együttes alkalmazásával végezhetjük, például dekántálással, majd szűréssel, csak szűréssel, vagy centrifugálással. A csapadékot előnyösen száríthatjuk, például szobahőmérsékleten, előnyösebben csökkentett nyomáson, dehidratálószer jelenlétében vagy távollétében végezzük a szárítást. Dehidratálószerként például kálium-hidroxidot, foszforsavanhidridet, vagy előnyösen kalciumkloridot használunk. A száradást enyhe melegítéssel is elősegíthetjük, előnyösen 40 °C-ot meg nem haladó hőmérsékleten. Kívánt esetben a csapadékot ebben a műveleti szakaszban például mechanikus zúzással homogenizálhatjuk. A csapadékot vízben is oldhatjuk, és például atomizálással vagy liofilezéssel száríthatjuk. A liofilezést a szokásos módon hajtjuk végre, például az átlagos méretű Société Usifroid gyártmányú SMU vagy SMRG-típusú fagyasztó-szublimáló berendezésben, vagy a nagy méretű CA1 fogyasztóból és SMIRS szublimátor egységből álló Usifroid gyártmányú berendezésben. Kisebb laboratóriumi berendezéseket, vagy más cégek — például a Société Sérail — által forgalomba hozott berendezéseket is használhatunk. A találmány szerinti eljárás kiindulási anyagait a 2 171 907 számú francia szabadalmi leírásban ismertetett módon állíthatjuk elő, például oly módon, hogy a bejelentő által 1981. június 29-én a Pasteur Intézetben, Párizsban 1-163 szám alatt letétbe helyezett törzsből (Klebsiella penumoniae CIP 52 145) baktérium tenyészetet készítünk, a sejteket lizáljuk, szárítjuk — például liofilezéssel —, oldószerekkel extraháljuk a lipideket, fizikai módszerrel — például centrifugálással — proteinmentesítjük, majd ultraszűrjük és — például liofilezéssel — szárítjuk. A 2 490 496 számú francia, 0 049 183 számú európai, és a 2 171 907 számú francia szabadalmi bejelentésben leírt glükoproteinek — megfelelő segédanyagokkal, és hordozóanyagokkal gyógyszerkészítménnyé alakítva - jelentős anti-allergiás hatással rendelkeznek. A fenti glükoproteinek ennélfogva allergiás rendellenességek gyógykezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények hatóanyagaként használhatók. A gyógyászati készítmények cseppfolyós vagy szilárd készítmények lehetnek, általában a humán gyógyászatban allergiás rendellenességek kezelésére használatos gyógyszerkészítmények — így egyszerű vagy cukorbevonatú tabletta, kapszula, szirup, aeroszol, kúp, injektálható készítmény, krém vagy balzsam — formájában készíthetők cl. A készítmények oly módon állíthatók elő, hogy a hatóanyagul a gyógyszerkés/ilésbcn szokásosan használt hordozó- és/vagy segédanyagokkal összekeverjük és gyógyászati készítménnyé formáljuk. Hordozó- és segédanyagként például talkumot, gumiarábikumot, laktózt, keményítőt, magnezium-sztearátot, kakaóvajat, vizes vagy nemvizes vivőanyagokat, állati vagy növényi eredetű zsírokat, paraffinszármazékokat, glikolokat, különféle nedvesítőszereket, diszpergálószereket, emuigeálószereket, konzerválószereket szín- és ízesítőanyagot használhatunk. A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények allergiás eredetű rendellenességek, közelebbről légzőszervi allergiák, például allergiás rhinitis, tracheitis vagy laryngitis; bőrallcrgiák, például ekcéma vagy urticaria; szemallergiák; vagy egyéb, különféle eredetű allergiás tünetek, például állati csípések/szúrások vagy ételallergia — kezelésére használhatók. A találmányt közelebbről — a korlátozás szándéka nélkül — az alábbi példák segítségével kívánjuk ismertetni. 1. példa Klebsiella pneumoniae 52 145 vagy a Pasteur Intézetben 1-163. letéti számú törzzsel, a 2 171 907 számú francia szabadalmi leírás 1. példája szerint előállított 1 kg termékből 4°C-on 16 óra alatt 10 g/1 koncentrációjú vizes oldatot készítünk. Az oldathoz 1 liter/perc sebességgel 0,8 térfogat 3 %-os cetil-trimetil-ammóniumbromid-oldatot adunk, és a kapott elegyet 1 órán át lassan keverjük. A kivált csapadékot 62 000 g-vel folyamatosan centrifugálva választjuk el, az átáramlási sebesség kb. 5 1/óra. A felülúszót üreges szál formában lévő, 5000 g/mól áteresztési küszöbértékű membránon (Hollow Fibers H10P5, Amicon and Romicon) ultraszűréssel koncentráljuk, két kezelési ciklusban, 5/1 arányban. 3 1/perc sebességgel 6 térfogat 96 %-os etanolt adunk az oldathoz, és 15 percen át lassan keverjük. A csapadékot dekantáljuk, elválasztjuk, öblítjük, 40 °C-ot meg nem haladó hőmérsékleten dehidratálószer jelenlétében szárítjuk, és mechanikus zúzással homogenizáljuk. 200 g kívánt terméket kapunk, amelynek jellemzői megegyeznek a 2 490 496 számú francia, illetve a 0 049 182 számú európai szabadalmi leírásban ismertetett termékjellemzőivel. 2. példa Tabletta előállítása 1. példa szerinti termék I mg segédanyagok q.s. 100 mg-ra (segédanyagok: laktóz, keményítő, talkum, magnéziumsztearát). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
