195480. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenil nonatetraénsav-származékok és azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
27 195 480 28 A jobb hátsó mancs térfogatát induláskor, a 2. és 4. napon, valamint az adjuváns injekció beadása után méijük (elsődleges fázis). A hátsó jobb és bal mancs térfogatát a 8. napon, valamint a kísérlet befejezé- 5 séig (15. nap) minden 2. vagy 3. napon méijük (másodlagos fázis). Ekkor az egyes bokaizületek mobilitását, valamint az orron, fülön, elülső mancsokon, bal hátsó mancson és a farkon fellépő másod- iq lagos sérülések gyakoriságát és súlyosságát a lehetséges behajb'tás alapján meghatározzuk és tetszőleges értékelő skála segítségével kifejezzük. Az eredmények értékelése 15 A fecskendezett mancsok idő-görbéjét a 0—4. napon (elsődleges duzzadás) és a 8—15. napon (másodlagos 20 duzzadás) integráljuk. Hasonlóképpen a be nem fecskendezett mancs másodlagos duzzadását a 8—15. napon integráljuk. Az eredményeket speciális komputerprogram segítségével számítjuk ki. amely az átlag ± szórás értéket minden integrált területre meghatározza. A kontrolitól való eltérés szignifikanciáját a Student féle ,,t teszttel (kétfarkas) határozzuk meg és a kontroll területekhez viszonyított százalékos csökkenést kiszámítjuk. Az izület-mobilitás százalékos javulását és a sérülési pontösszeg százalékos csökkenését szintén meghatározzuk. Utóbbi esetben a kontroll pontértékektől való eltérés kifejezésére (nyers adatok— A Wilcoxon-féle tesztet alkalmazzuk (kétfarkas). Minden csoportban feljegyezzük az átlagos testsúlyváltozást. Eredmények: Az eredményeket a III. táblázatban adjuk meg. III. táblázat A-vegyület és eríretinát hatása arthritis adjuvánsra, patkányon Kezelés Dózis Mancsduzzadás %-os csökkenése1 Sérülés2 ízület1 Testsúly változás (g) mg/kg Elsődleges Másodlagos Másodlagos pontszám mobilitás p.o. (jobb) (jobb) (bal) (% RDN) {% INC) 0-15 8-15. napon napon Normál kontrollAdjuváns kontroll — — A-vegyület 15- 6 45 16 Ertretinát 15 9 30 94XXX 72x 51 xxx 75xx 65 x 30 67x 56x+ 13,3XXX +3,7:- 0,6-5,5 66xx + 2,2-0,4 66xx + 5,4 +1,2 50 + 1,0-5,0 1. A statisztikus analízist a Student-féle „t -teszttel végezzük el (kétfarkas). 2. A statisztikus analízist a Wilcoxon-féle tesztttel végezzük el (kétfarkas). 45 x = P<0,5 xx = P <0,02 xxx = P< 0,01 40. példa Az A-vegyület hatása II-típusú kialakult kollagén arthritisre 50 Állat: hím és nőstény Alderley Park (1. törzs) patkányok. Anyag: 2. típusú kollagén (szarvasmarha orrsövényporcból készítjük). Freund-féle nem 55 teljes adjuváns (Difco). Módszer: az állatokat 2. típusú kollagénnel szenzitizáljuk oly módon, hogy intradermálisan 1 ml olaj-a-vízben emulziót fecskendezünk be; az emulzió azonos mennyi- 60 ségben 1 mg/ml 2. típusú kollagént 0,45 mólos nátrium-kloridban, 0,02 mól triszpuffert (pH = 7,4) és Freund-féle nem-teljes adjuvánst tartalmaz. A kifejlődött arthritist mutató patkányokat az érzéke- 65 nyítés utáni 15. napon arachisolajjal kezelt kontroli-csoportokra (6 hím, 4 nőstény) és A-vegyülettel kezelt csoportokra (6 hím, 5 nőstény) osztjuk. A patkányoknak a csoportokban való egyenletes elosztását biztosítandó a hátsó mancs térfogatát mérjük meg. A 15—16. nap közötti éjszakán vizeletet gyűjtünk és az adagolást a 16. napon kezdjük meg. Meghatározzuk a vizelet-minták glikó-amino-glikán (GAG) tartalmát. Az A-vegyületet 100 mg/kg p.o. dózisban adagoljuk. A 19—20. nap közötti éjszakán második vizeletgyűjtést végzünk. E vizeletminták glikóz-amin-glikán-tartalmát is meghatározzuk. A 20. napon másodszor megmérjük a bal hátsó mancs térfogatát. A patkányokat nátrium-pentobarbitonnal érzéstelenítjük, kivéreztetjük, leöljük és a hátsó és első mancsot megröntgenezzük. A patkányok a 16-19. napon kapnak kezelést (4 dózist). Eredmények: Az eredményeket a IV. táblázat tartalmazza. 15
