195474. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-fenil-benzamid-származékok előállítására
7 195 474 8 II. táblázat Vizsgált anyag Dózis + 8 nap Állatok 2 kilökődött bőrtranszplantátummal (r,, //) + 9 nap + 10 nap + 1 1 nap + 12 nap Kontroll (Metocel i. g.) 2/10(20) 5/10 (50)x 6/10(60) 8/10(80) 9/10(90) A anyagxx 4-8 mg/kg i.g. -1 -tői + 9 napig 0/10(0) 1/10(10) 1/10(10) 1/10(10) 6/10 (60)x Azatioprin 20-60 mg/kg i. g. - 2-től + 9 napig 0/10(0) 1/10(10) 2/10(20) 4/10(40) 5/10 (50)x x Kilökődés napja: az állatoknak legalább 50%-ánál mindkét xxzl anyag: 4-amino-N-/2’-amino-fenil/-benzamid (1. példa) 20 II. Az A anyag immunszuppressziv hatásának vizsgálata börtranszplantátum-túlélési tesztben. Rhesus-majom (Macaca mulatta) 25 A bőrátültetési modellben kimutatott hatást a celluláris immunrendszerre (T-limfociták) gyakorolt gátlásként értékeljük, mivel a mai álláspont szerint ez vesz részt elsősorban az allogén transzplantátum kilökődési reakciójában. 30 A humorális immunrendszernek (antitestképző B- límfociták) a találmány szerinti vegyületek általi gátlására és az ebből eredő terápia lehetőségére például autoagresszív betegségek esetében — melyeket túlzott antitest-képzés jellemez a saját szövetekkel szemben — 35 jelenleg csak indirekt módon következtethetünk. Az A anyag nagy dózisaival huzamos ideig kezelt patkányoknál a baktériumos fertőzésekkel szemben megfigyelt fokozott érzékenység a humorális immunrezisztencia közvetett bizonyítékának tekinthető. 40 A) Technika Kontroll standard: nem használtunk etikai okokból 45 Előállítás: minden alkalmazás előtt frissen előállítva Alkalmazás módja: intragasztrikus (i. g.), gyomorszondán át, 0,8% metocelben szuszpendálva Adagolási rend: lx naponta 10 napig Vizsgált dózis: 10 mg/kg 50 B) Kísérlet leírása 2 különböző donor állatból származó, összesen 4 al- 55 logén bőrlebenyt keresztezve átviszünk rokonságban nem álló 1 recipiens állatra. Először a bó'rlebenyt ketamin-narkózis alatt eltávolítjuk a donor állatok leborotvált és megtisztított gyomortáji bőréből és megszabadítjuk a hozzátapadó zsírszövettől. A négy bőrlebenyt 60 befogadó helyeket a recipiens állat leborotvált és megtisztított hátán ketaminnarkózis alatt készítjük elő megfelelő méretű bőrdarabok eltávolítása útján. Eredményes vérzéscsillapítást követően a bőrlebenyeket szétterítjük a receptor helyeken és a seb széleihez varr- 65 transzplantátum kilökődött juk. A sebet alkalmas kötszerrel lefedjük és ezt rugalmas kötéssel rögzítjük. A kötést felnyitjuk a transzplantálás utáni 5., 7. és 9. napon és megfigyeljük a transzplantátumok funkcióját. A 9. napon a kötést nem tesszük vissza. A transzplantátum funkciót azután naponta ellenőrizzük a kilökődés bekövetkeztéig. C) Eredmények A kontrollokat etikai okokból mellőzzük ebben a főemlősökön végzett próbában. Az összehasonlítás alapjául régebbi kontrollok allogén bőrtranszplantátumainak normális túlélése szolgál, amit 10 napban jelölnek meg. A transzplantátum normális túlélési idejének meghosszabbodása érhető el az A anyaggal a vizsgált dózisban, éspedig a ZE kísérleti állatnál 6—7 nappal és az XL kísérleti állatnál 4—5 nappal. Ezt a hatást a találmány szerinti vegyület kifejezett immunszuppreszszív hatásának kell tulajdonítani. Az 1. és 2. ábra az A anyag 10 napos alkalmazásának hatását mutatja Rhesus-majmok vérplazmájának leukocitáira és limfocitáira. Dózis: 1 x napi 10 mg/kg i. g. 1. ábra: Rhesus-majom ZE, 9 2. ábra: Rhesus-majom XL, 9 J1I. Az A anyag daganatgátló hatásának vizsgálata egéren, 3 tumor modellen Az A anyagot tumoros- egereknek intragasztrikusan alkalmazva az állatok átlagos túlélési ideje jelentősen megnő, és a vizsgált daganat növekedésének kifejezett retardádiója (késleltetése) figyelhető meg, összehasonlítva a kezeletlen kontroll állatokkal. Patkányoknál az A anyag alkalmas oldószerben való helyi alkalmazása a növekedő szőrtüsző kifejezett gátlását eredményezi. A növekedő szőrtüsző gátlása gyakran megfigyelhető mellékhatás, melyet a szisztémás citosztatikus kezeléssel kapcsolatban a szakirodalomban leírtak. A jelenség az ilyen vegyületek proliferáció elleni hatásának megnyilvánulása, amely különösen a gyorsan proliferáló szöveteket érinti. 5
