195253. lajstromszámú szabadalom • Eljárás makrolid csoportba tartozó antibiotikumok előállítására mikrobiológiai úton és eljárás ezen antibiotikumokat tartalmzó állatgyógyászati készítmények előállítására
5 195253 6 2. táblázat (folytatás) T-13 jelű törzs Str. alhogriseolus ISP 5003 . ....... Str. flocculus ISP 5327 Str. mutatilis ISP 5169 Str. tendae ISP 5101 Kromogenitas /tirozin-agar/ negatív negatív negatív negatív negatív Kromogenitas /vas-pepton agar/ negatív negatív negatív negatív negatív S zénhidrát-hasznositás glükóz arabinóz xilóz mannit fruktóz ramnóz raffinóz inozit szacharóz pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív negatív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív negatív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív kétes kétes pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív negatív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív negatív pozitív pozitív P = fehér, S = sárga, SB = sárgás-barna, Sz = szürke Ret.ap.= retinaculum apertum, nem ind.= nem indikátor jellegű A közelrokon fajok törzseivel szemben a hasonlóság feltűnő. Ezek a szervezetek gyakorlatilag valamennyien raffinóz negatívak, más szén-forrásokat általában — egy-egy esetleges kivételtől eltekintve — jól értékesítenek. Elektronmikroszkópos spórafelületi morfológiájuk sima, nem ornamentáit. A szubsztrát-micéliumok színe jellegtelenül sárgásbarna. Melanoidokat semmiféle szén- és nitrogén-forrás kombinációban nem termelnek. Spóratartóik szabálytalan primitív retinaculum-apertum típusúak, viszonylag nem nagyszámú spórával. A T-13 törzs gyengén sporulál. Ezért a szórványos légmicéliumon gyakorta átüt a szubsztrát-micélium sárgás színe, ami sárga -szín-szeriesz meghatározást vonhat maga után. Az érett spóratömeg azonban a szürke-szerieszt képviseli.. A T-13 törzs és a Streptomyces tendae ISP 5101 típus törzs között csak egyetlen eltérés jelentkezik: a Streptomyces tendae ISP 5101 törzs szubsztrát-micéliumának gyenge indikátor-karaktere. Ez viszont nem faji bélyeg. Ennek alapján megállapítható, hogy a Streptomyces T-13 jelű törzs a Streptomyces tendae fajhoz tartozik, amelynek tilozin antibiotikum-komplexet termelő törzse eddig még nem volt ismeretes. Az antibiotikum termelés fokozása és a termelt antibiotikumok kívánt arányának beállítása céljából a talajból izolált T-13 jelű Streptomyces tendae törzset UV-besugárzással mutagén kezelésnek vetettük alá. A kezelést túlélők közül kiválasztottunk egy olyan izolátumot, mely az állatgyógyászatban hasznosított tilozin A-t főtermékként bioszintetizálja csak kis mennyiségben termel rokonszerkezetű antibiotikumokat. Az így nyert törzs a tilozin A-t nagyobb arányban bioszintetizálja, mint a technika állásából megismert törzsek. E Streptomyces tendae törzset 1983 augusztus 8-án MNG 00274 szám alatt az Országos Közegészségügyi Intézetnél a Mikro-4 organizmusok Nemzeti Gyűjteményében letétbe helyeztük. 25 A T-13 jelű Streptomyces tendae törzzsel az antibiotikum termelés szempontjából optimális tenyésztési körülmények megállapítására fermentációs technológiai kísérleteket végeztünk, és eljárást dolgoztunk ki a bioszin- 30 tetizált antibiotikumok fermentléből történő elkülönítésére, egymástól való elválasztására, és állatgyógyászati és takarmányozási szempontból elfogadható sóik előállítására. Az általunk fermentációs úton előállított tilozint 35 és sóit az állatgyógyászatban és az állattenyésztésben alkalmazzuk. A fentiek alapján a találmány eljárás tilozin antibiotikum-komplexnek és komponenseinek: az la képletű tilozin A-nak, az Ib képle- 40 tű tilozin C-nek, az Ic képletű tilozin D-nek és az Id képletű laktenocinnak, valamint állatgyógyászati és takarmányozási szempontból elfogadható sóiknak előállítására aerob fermentációval és adott esetben azt követő só- 45 képzéssel, amely abban áll, hogy a Streptomyces tendae sugárgomba faj MNG 00274 sz. alatt letétbe helyezett törzsét, vagy annak valamely — tilozin antibiotikum-komplexet termelő — mutánsát vagy variánsát, szerves 50 nitrogén- és szénforrást, valamint ásványi sókat tartalmazó táptalajon 25—40°C-on tenyésztjük, majd a képződött tilozin antibiotikum-komplexet elkülönítjük a fermentléből, kívánt esetben a kapott antibiotikum-komplex 55 komponenseit egymástól elválasztjuk és/vagy kívánt esetben állatgyógyászati és takarmányozási szempontból elfogadható sóvá alakítjuk. A tilozin-komplex termelésére szolgáló tápgQ talajban a sugárgomba által asszimilálható különféle szén- és nitrogénforrások, szervetlen sók és habzásgátlók lehetnek jelen. A szén-források közül a melaszt, a lenolajat és a szójaolajat, a nitrogén-források közül a hallisztet, a kukoricalekvárt és a szó- 65 jalisztet találtuk előnyösnek. Azt tapasztal-
