195252. lajstromszámú szabadalom • Eljárás apramicint, 6"-O-karbamoil-tobramicint és 6"-O-karbamoil- kanamicin B-t tartalmazó fermentlevek előállítására, mikrobiológiai úton
1 195252 2 A találmány tárgya eljárás előre meghatározott összetételű, apramicinből, 6”-0-karbamoil-tobramicinből és 6”-0-karbamoil-kanamicin B-ből álló antibiotikum keveréket tartalmazó fermentlevek előállítására mikrobiológiai úton. Ismeretes, hogy a Streptomyces tenebrarius több komponensből álló, nebramicinnek elnevezett antibiotikum-keveréket bioszintetizál (Stark, Hoehn és Knox, Antimicrobial Ágenst and Chemotherapy, 1967, 314. oldal; 1 178 489 számú brit és 3 691 279 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás). Az antibiotikum-keverék több minor komponens mellett nebramicin-2 (apramicin), nebramicin-4 (6“-0-karbamoil-kanamicin B) és nebramicin-5'' (6“-0-karbamoil-tobramicin) major komponenseket tartalmaz (Koch, Davis és Rhoades, J. of Antibiotics, 26, 745, 1973). A 3 853 709 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban a szerzők nebramicin-2-mellett nebramicin-7-et termelő mikroorganizmust írnak le. Japán szerzők a 4 032 404 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban Streptoalloteichus hindustanus törzs tenyésztésével oldják meg a nebramicin-2 és nebramicin-5’ együttes előállítását. A 176 103 számú magyar szabadalmi le-1. táblázat írás szerint eljárva a Streptomyces tenebrarius MNG 169 és 170 deponálási számú törzsek süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények közötti tenyésztésével első eset- 5 ben nebramicin-2-t, nebramicin-4-et és nebramicin-5’-t, második esetben nebramicin-2-t és nebramicin-5’-t tartalmazó fermentleveket kapnak. Ezekbőt az antibiotikumokat a 174 315 számú magyar szabadalmi leírás szerint izo- 10 lálják. A nebramicin-2 növényi és állati megbetegedéseket okozó mikroorganizmusok növekedését gátolja (3 691279,3 853 709 és 3 876 763 számú amerikai egyesült államok- 15 beli szabadalmi leírások), a nebramicin-4 hidrolízisével előállított kánamicin B és elsősorban a nebramicin-5’ hidrolízise után kapott tobramicin (Brulamycin) pedig forgalomban lévő, szélesspektrumií, polírezisztens baktériu- 20 rnok okozta fertőzések leküzdésében jelentős szerepet játszó, a humán terápiában használt antibiotikumok (például Preston és Wick, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1970, 322. oldal). 25 A 176 103 számú magyar szabadalmi leírás szerint eljárva az 1. táblázatban megadott összetételű antibiotikum-keveréket kapj uk: Törzs Nebramicin-2 Nebramicin-4 Nebramicin-5' % MNG 169 MNG 170 77 2 21 91 nyomokban 9 Látható, hogy a törzsek túlnyomó részben nebramicin-2-t bioszintetizálnak. A nebramicin-5’-t a túlsúlyban lévő egyéb komponensektől bonyolult és költséges eljárással különítik el. 50 Egy mikroorganizmus által bioszintetizált antibiotikum-komplex összetételét döntően a sejt genetikai információ-készlete határozza meg, kisebb részben a fermentációs körülmények. 55 Az ismert eljárásokkal nem tudnak az egyes komponensek iránti mindenkori piaci igénynek megfelelő összetételű fermentleveket előállítani. Ezenkívül, ha nebramicin-5’-t kívánnak termelni, úgy azt költséges eljárá- ^ sokkal kell elkülöníteni a túlsúlyban lévő nebramicin-2-től. A találmány célja olyan új és egyszerűen kivitelezhető fermentációs eljárás kidolgozása, amellyel előre meghatározott összetételű, nebramicin-2-ből, nebramicin-4-bőI és nebramicin-5-ből álló antibiotikum keveréket tartalmazó fermentlevek állíthatók elő. Kísérleteink során megfigyeltük, hogy a Str. tenebrarius MNG 169 törzsből etidium-bromidos (2,7-diamino-10-etil-fenil-fenantridinium-bromid) kezelést követően, meglepő módon nebramicin-2-t egyáltalán nem, nyomnyi mennyiségű nebramicin-4-et, és főkomponensként nebramicin-5’-t bioszintetizáló törzs izolálható. A jelenség annál is inkább váratlan és meglepő, mert az etidium-bromidot nem használják mutációs kiváltó szerként. A 176 103 sz. magyar szabadalmi leírásban ismertetetthez képest megváltozott komponens-összetételű antibiotikum keveréket bioszintetizáló sejtek izolálására a Streptomyces tenebrarius MNG 169 törzs spóráit folyékony halmazállapotú táptalajban tenyésztettük. A tenyészetet kinövése után öt részre osztottuk és 0, 0,05, 0,5, 5,0, illetve 50,0 pg/ml etidium-bromidot adagoltunk 2
