195251. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az új A80190 jelű antibiotikum származékai és ezeket tartalmazó gyógyhatású készítmények előállítására
23 195251 a reakciókeveréket szobahőmérsékleten hagyjuk állni 72 órán keresztül. 10 ml vizet adunk hozzá, és a vizes oldatot 50 ml kloroformmal extraháljuk. A kloroformos extraktumot 50 ml 0,1 n sósavval, 50 ml 1%-os nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és 50 ml vízzel mossuk. A kloroformos extraktumot ezután csökkentett nyomáson bepároljuk, a maradékot 100 ml acetonban oldjuk. Az acetonos oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, eltávolítva a maradék píridint és ecetsavat. Ezt a lépést háromszor megismételjük, és a nyert maradékot 50 ml acetonban oldjuk. 50 ml vizet adunk az oldathoz, és szobahőmérsékleten hagyjuk állni, mialatt megtörténik a kristályosodás. A kristályokat szűréssel eltávolítjuk, vízzel mossuk, csökkentett nyomáson 50°C hőmérsékletű szárítószekrényben szárítjuk, 192 mg kristályos mono-acetiI-A80190-et nyerve. Op.: 87-89°C. Molekulatömeg: 870 [„fast-atom bombardment" tömegspektrometriával (FABMS) megállapítva] . IR (CH3CI3): 3021, 3018, 2935, 2825, 1726, 1434, 1373, 1311, 1244, 1162, 1104, 1078, 1058, 1024, 987, 976, 934 és 925 cm“1 (3. ábra). 9. példa A mono-propionil-A80190 előállítása: 200 mg A80190-et (savformában) feloldunk 4 ml piridinben, hozzáadunk 4 ml propionsavhidridet, és a reakciókeveréket szobahőmérsékleten hagyjuk állni 72 órán keresztül. 10 ml vizet adunk hozzá, és az oldatot 50 ml kloroformmal extraháljuk. A kloroformos extraktumot 50 ml 0,ln sósavval, 50 ml 1 %-os nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és 50 ml vízzel mossuk. A kloroformos extraktumot csökkentett nyomáson bepároljuk, és a maradékot 100 ml acetonban oldjuk. Az acetonos oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk a maradék piridin és ecetsav eltávolítása céljából. Ezt a lépést háromszor megismételjük. A maradékot 50 mi acetonban oldjuk, 50 ml vizet adunk hozzá. Az oldatot szobahőmérsékleten hagyjuk állni 16-20 órán keresztül, mialatt megtörténik a kristályosodás. A kristályokat szűréssel kinyerjük, vízzel mossuk és csökkentett nyomáson szárítjuk 50°C hőmérsékletű szárítószekrényben. 170 mg kristályos mono-propionil-A80190-et kapunk. Op.: 83-85°C. Molekulatömeg: 884 (FDMS és FABMS alapján) IR (CHC13): 3018,2976, 2935, 2827, 1725, 1460 1376, 1313, 1160, 1105, 1082, 1058, 1024, 987, 979, 945, 935 és 893 cm-1 (4. ábra). 10-12. példa A 8-9. példákban ismertetett eljárás szerint a következő A80190 észterszármazékokat is előállíthatjuk: valeril-A80190 és terc-buti ril-A80190. 13. példa Az A80190 4-bróm-fenii-amino-karbonil-származékának előállítása: 7 g A80190-et (sav-formában) feloldunk 100 ml benzolban, és 100 ml benzolban oldva 3 g 4-bróm-fenil-izocianátot adunk hozzá keverés mellett. A reakciókeveréket szobahőmérsékleten kevertetjük 168 órán keresztül. A reakciót naponként vett mintával követjük nyomon, vékonyréteg-kromatográfiát alkalmazva. A szilikagél rétegen aceionitril/aceton 1:1 arányú elegyével fejlesztünk ki, a kromatogrammot kénsavas vanilin reagenssel hívjuk elő. A reakció 168 óra elmúltával teljes. A keletkezeit csapadékot szűréssel eltávolítjuk, a szűriet tartalmazza a származékot és kevés nem reagálódott A80190-et. A szűrletet bepárolva és fagyasztva szárítva, 7,5 g terméket kapunk. Ezt a terméket 50 ml acetonitrilben oldjuk, és 3x140 cm méretű, acetonitril ágyas szilikagél oszlopra (800 ml;- Woelm, 0,105- 0,205 mm) visszük. Az oszlopot acetonitrillel eluáljuk, egy 500 milliliteres, öt 100 milliliteres és hat 500 milliliteres frakciókat gyűjtve. Az elúciót szilikagél-vékonyréteg-kromatográfiával követjük nyomon. Egy éjszakán át szobahőmérsékleten állva, a negyedik frakcióból kristályok válnak ki. A kristályokat szűréssel kinyerjük, csökkentett nyomáson szárítjuk, 689 mg A80190 4-bróm-fenil-uretán-származékot nyerve. A szűrletet szárazra pároljuk, és a maradékot 50 ml dioxánban oldjuk, fagyasztva szárítjuk, további 477 mg termékhez jutva. Az 5-10. frakciókat egyesítjük és szárazra pároljuk. A bepárlási maradékot 50 ml acetonitrilben oldjuk és szárazra párolva újabb 2,3 g amorf A80190 4-bróm-fenil-amino-karbonil származékot nyerünk. A vegyület jellemzői: Op.: 142-I45°C. [a]r>5=+4° (c= 10, CHCI3). Molekulatömeg: 1025 (FABMS szerint). 14. példa Az A80190 azonosítása kromatográfiás módszerekkel: a) Vékonyréteg-kromatográfia szilíkagélen. Az eluens: acetonitril/aceton, 1:1. Rf=0,59. Detektálás: Bacillus subtilis-szel, illetve kénsavas vanilin reagenssel. b) HPLC. Adszorbens: p Bondapack C18 (4x300 mines oszlop). Oldószerrendszer: acetonitril/tetrahidrofurán/víz/: 1:3 arányú elegye, mely 1% foszforsavat tartalmaz. Kémhatása ammónium-hidroxiddal pH=3,0 értékre beállítva. Detektor: refraktométer. Áramlási sebesség: 3,0 ml/perc. Retenciós idő: 9,7 perc. 15. példa Az A80190-et az 1. példában leírtak alapján állítjuk elő, de Actinomadura oligosporus NRRE 15877 tenyészetet használunk. 24 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
