195250. lajstromszámú szabadalom • Eljárás triciklusos makrolidok előállítására
195250 viszont a Streptomyces misakiensis 1FO 12891 képes hasznosítani a D-galaktózt és az inulint. A továbbiakban ismertetjük az FR-900506, FR-900520 és az FR-900525 anyagok termelésének körülményeit. Az FR-900506, FR-900520 és/vagy FR-900525 anyagokat termelő törzsek a Streptomyces nemhez tartoznak, (pl. Streptomyces tsukubaensis 9993, FERM BP 927). Az FR-900506, FR-900520 és FR-900525 anyagokat az FR-900506, FR-900520 és/vagy FR-900525 anyagokat termelő törzsek vizes táptalajon történő tenyésztésével állítjuk elő. A táptalaj asszimilálható szén- és nitrogénforrásokat tartalmaz, és a tenyésztést előnyösen aerob körülmények között végezzük (pl. rázott tenyészetben, süllyesztett tenyészetben, stb.). Előnyös szénforrások a szénhidrátok, például a glükóz, xilóz, galaktóz, glicerin, keményítő, dextrin, stb. Alkalmazható még a maitóz, ramnóz, raffinóz, arabinóz, mannóz, szalicin, nátrium-szukcinát, stb. Előnyös nitrogénforrás az élesztőkivonat, pepton, sikér, gyapotmagliszt, szójaliszt, kukoricalekvár, szárított élesztő, búzacsíra, toll-liszt, földimogyoróliszt, stb., valamint a szervetlen és szerves nitrogén vegyületek, például az ammóniumsók (ammónium-nitrát, ammónium-szulfát, ammónium-foszfát, stb.) karbamid, aminosavak, stb. A szén- és nitrogénforrásoknak, noha előnyösen kombinálva használjuk őket, nem szükséges, hogy tiszta állapotban legyenek, minthogy a kevésbé tisztított anyagok nyomnyi mennyiségű növekedési faktorokat, és jelentékeny mennyiségű ásványi tápanyagot tartalmaznak. Ha szükséges ásványi sókat, például nátrium- vagy kalcium-karbonátot nátrium- vagy kálium-foszfátot, nátriumvagy kálium-kloridot, nátrium- vagy kálium-jodidot, magnéziumsókat, rézsókat, kobaltsót, stb., adhatunk a tápközegbe. Ha a tenyészlé erősen habzik, habzásgátlót, pélául folyékony paraffint, növényi olajat, ásványi olajat vagy szilikont adhatunk hozzá. Az FR-900506, FR-900520 és FR-900525 anyagok nagy mennyiségben való előállításához süllyesztett aerob tenyészet az előnyös. Kis mennyiség termeléséhez rázott vagy felületi tenyészető lombikot vagy edényt használunk. Ha a tenyésztést nagyméretű fermentorban végezzük, előnyös a termelő tenyészet táptalaját vegetatív állapotban levő oltóanyaggal beoltani, hogy ezáltal elkerüljük a termelőfolyamat „lag“ fázisát. Ezért tehát egy viszonylag kis térfogatú táptalajt a mikroorganizmus spóráival vagy micéliumaival oltunk be. Ezt a tenyészetet hívjuk vegetatív oltóanyagnak. A vegetatív oltóanyagot aztán steril körülmények között átvisszük a nagy fermentorba. A vegetatív oltóanyag táptalaja vagy lényegében ugyanaz a táptalaj, amit az FR-900506, FR-900520 és FR-900525 anyagok termelésére használunk, vagy attól eltérő. 7 A tenyészlé keverését és levegőztetését különböző módon oldhatjuk meg. A keverést végezhetjük propelleres vagy más hasonló mechanikai keverőberendezéssel, a fermentor forgatásával vagy rázásával, különféle szivattyú berendezésekkel, vagy steril levegőnek a táptalajon történő átvezetésével. A levegőztetést steril levegőnek a táptalajon történő átáramoltatásával végezzük. A fermentációt általában 20°C és 40°C, előnyösen 25°C—35°C hőmérsékleten végezzük. Az alkalmazott fermentációs körülményektől és a méretektől függően a fermentációs idő 50—150 óra. A termelt FR-900506, FR-900520 és/vagy FR-900525 anyagokat más bioaktív anyagok kinyerésénél használt ismert eljárások szerint izoláljuk. A keletkezett FR-900506, FR-900520 és FR-900525 anyagok a micélium frakcióban és a szurletben találhatók, és. onnan elkülöníthetők és tisztíthatok. Ehhez a tenyészlevet szűrjük, vagy centrifugáljuk és a kinyeréshez a szokásos eljárásokat alkalmazzuk, azaz a csökkentett nyomáson történő bepárlást, fagyasztva szárítást, alkalmas oldószerrel való extrahálást, pH beállítást, alkalmas gyantával (anion vagy kation cserélő, nem ionos adszorbciós gyanta, stb.) való kezelést, a szokásos adszorbensekkel (aktív szén, szilikasav, szilikagét, cellulóz, alumínium-oxid, stb.) való megkötést, kristályosítást, átkristályosítást, stb. Az FR-900506, FR-900520 és az FR-900525 anyagok fizikai és kémiai tulajdonságait az alábbiakban adjuk meg: FR-900506 1. ) Megjelenés és szín: fehér por. 2. ) Elemanalízis: C: 64,72 H: 8,78 N: 1,59 %, 64,59 8,74 1,62 %. 3. ) Színreakciók: pozitív: cérium-szulfát reakció, kénsavas reakció, Ehrilich, reakció, Dragendorff reakció és jódgőzös reakció. negatív: vas (III)-klorid reakció, ninhidrin reakció és Molish reakció 4. ) Oldahtóság: oldható: metanolban, etanolban, acetonban, etil-acetátban, kloroformban, dietil-éterben és benzolban, mérsékelten oldódik: hexánban, petroléterben. oldhatatlan: vízben. 5. ) Olvadáspont: 85-90°C 6. ) Fajlagos forgatás: (a)|,3 —73° (C=0,8, kloroform) 7. ) Ultraibolya elnyelés: végabszorpció CHC1 8. ) Infravörös spektrum, y 3 (1 max 3680, 3580, 3520, 2930, 2870, 2830, 1745, 1720, 1700, 1645, 1450, 1380, 8 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
