195250. lajstromszámú szabadalom • Eljárás triciklusos makrolidok előállítására

23

9) 13C magmagneses rezonanciaspektrum (9. ábra), delta (ppm,

CDCIO : 213,82

(s) ,

196,31

(s) ,

168,96

(s),

213,32

(s) ,

193,34

(s),

168,85

(s),

164,84

(s),

137,80

(s),

132,89

(s),

165,98

(s),

138,41

(s),

131,96

(s),

129,62

(d),

124,51

(d),

97,13

(s),

130,03

(d),

124,84

(d),

98,67

(s),

84,38

(d),

76,69

(d),

75,45

(d),

78,06

(d),

76,91

(d),

73,89

(d),

73,70

(d),

73,09

(d),

73,70

(d),

72,84

(d),

70,40

(d),

56,75

(d),

56,93

(q) »

69,24

(d),

52,89

(d),

57,43

(q),

56,61

(q),

56,24

(q) >

48,58

(t),

56,56

(q),

55,94

(q),

48,32

(t),

47,14

(d),

40,23

(d),

27,85

(t),

47,38

(d),

40,65

(d),

26,32

(t),

26,48

(d),

24,68

(t),

21,33

(t),

26,64

(d),

20,83

(t),

20,63

(q),

16,24

(q) >

15,70

(q),

19,77

(q),

16,34

(q),

15,96

(q),

15,51

(q) »

14,31

(q),

9,64

(q),

15,96

(q),

14,18

(q),

10,04

(q).

R,

0,38

0,51.

10) 'H magmágneses rezonanciaspektrum:

10. ábra.

11) Vékonyréteg-kromatográíia: adszorbens futtató rendszer

kloroform/metanol (20:1)

szilikagél

etil-acetát

12) Az anyag jellege: semleges.

Megjegyezzük, hogy a FR-900523 anyag

13C és 'H magmágneses rezonanciaspktrumában különféle kémiai eltolódású csúcsok párként jelentkeznek, a vékonyréteg-kromatoggrammon viszont egy foltot, a HPLC vizsgálatokban egy csúcsot ad az FR-900523 vegyület.

A fenti fizikai és kémiai tulajdonságok alapján, valamint az FR-900506 vegyület kémiai szerkezetének ismeretében az FR-900523 vegyület kémiai szerkezete az (V) képlettel, ábrázolható: 1,14-dihidroxi-12- [2- - (4-hidroxi-3-metoxi-ciklohexil) - 1-metil-vi-7. Táblázat

Az FR-900506 vegyület hatása

nil] -23,25-dimetoxi-13,17,19,21,27-pentametii-11,28-dioxa-4-azabiciklo [24.3.104*9] oktakoz-18-én-2,3,10,16-tetraon.

5 A találmány (I) általános képletű vegyületei gyógyászati hatással rendelkeznek, amennyiben főleg imunszupresszív és antimikrobiális hatásuk van, és ezáltal alkalmasak az olyan folyamatok, illetve betegsé- 10 gek leküzdésére és megelőzésére, mint a szervek és szövetek — például szív, vese, máj, csontvelő, bőr, stb. — átültetésével szembeni ellenállás, a csontvelő átültetését követő „graft versus kost“ betegség, az autoimmun 15 betegségek — például rheumatoid arthritis, általános lupus erythermatózus, Hashimoto-féle pajzsmirígy-gyulladás, selerosis multiplex, myasthenia gravis, I. típusú cukorbaj, ureitis, stb. — patogén mikroorganizmusok 20 által okozott fertőző betegségek, stb.

Az alábbiakban néhány példát adunk meg a fenti triciklo-vegyületek gyógyászati hatásának vizsgálatára.

1. próba — az (I) triciklo-vegyületek szup- 25 resszív hatása in vitro kevert limfocita reakcióban (Mixed Lymphocyte Reaction — MLR).

Az MLR próbát mikrotiter lemezeken végezzük; az egyes tálkák 5 x 105 C57BL/6 reagáló sejtet (H-26), 5 x 105 30 mitomicin C-vel kezelt (25 pg/ml mitomicin C oldatban 37°C hőmérsékleten 30 percig, majd háromszori mosás RPMI 1640 közeggel) BALB/C stimulátor sejtet (H-2tf) tartalmaznak 0,2 ml RPMI 1640 közegben, 35 mely még 10% borjú embrió szérumot, 2 mM nátrium-hidrogén-karbonátot, 50 egység/ml penicillint és 50 egység/ml sztereptomicint is tartalmaz. A sejteket 37°C hőmérsékleten inkubáljuk nedves, 5% szén-dioxid és 95% 40 levegő összetételű légtérben 68 órán keresztül, és a sejteket összegyűjtésük előtt 4 órával 3H-timidinnel (0,5 pCi) hozzuk össze. A vizsgálandó vegyületet etanolban oldjuk, RPMI 1640 közeggel hígítjuk, és annyit adunk a tenyészethez, hogy a végkoncentráció 0,1 pg/ml vagy ennél kevesebb legyen.

A kapott eredményeket a 7-10. táblázatban mutatjuk be. A találmányban szereplő triciklo-vegyületek szupresszálták az egér MLR-t.

195250

24

45

50

az MLR-re

•900506 koncent:ió (ng/ml)

Radioaktivitás (átlagos cpm+S.E.)

Szupresz- IC50

szió (%) , ,

(mg/ml)

2,5

54+4

99,5

1,25

168+23

98,3

0,625

614+57

93,8

0,313

3880+222

60,9 0,26

0,156

5490+431

44,7

0,078

7189+365

27,6

0

9935+428

13