195250. lajstromszámú szabadalom • Eljárás triciklusos makrolidok előállítására
195250 nátrium-klorid jelenlétében, míg a Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 ilyen körülmények között nem növekszik. A 7238-as törzs szénforrásként hasznosítja a laktózt, inulint és a szalicint, a Strep tomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 erre képtelen. A 7238-as törzs nem tudja hasznosítani a glicerint, D-xilózt, D-fruktózt, raffinózt, D-galaktózt, D-mannózt mannitot és nátrium-szukcinátot, míg a Streptomyces hygroscopicus subsp glebosus IFO 13786 hasznosítja ezeket. A 7238-as törzs viszont hasonló a Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 törzshöz a zablisztes agaron vagy szervetlen sókat és keményítőt tartalmazó agaron tenyésztett telepek légmicéliumaiban levő higroszkópos spóratömeget, valamint más, morfológiai és a tenyészetekre jellemző tulajdonságaikat illetően. Ezek alapján à 7238-as törzs a Streptomyces hygroscopicus fajhoz tartozik, de különbözik a Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786-tól, noha a Streptomyces hygroscopicus fajon belül ehhez a leghasonlóbb. E tényből kiindulva a 7238-as törzset a Streptomyces hygroscopicus egy új törzsének tekintjük, és Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis subsp. nov. elnevezéssel látjuk el, ami.arra utal, hogy a mikroorganizmust Yakushimánál gyűjtött talajmintából izoláltuk. Az FR-900520 és az FR-900523 anyagokat az FR-900520 és/vagy FR-900523 anyagokat termelő Streptomycesek (például a Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis 7238, FERM BP-928) tenyésztésével állítjuk elő. Általában, az FR-900520 és/vagy FR-900523 anyagokat termelő törzseket asszimilálható szén- és nitrogénforrásokat tartalmazó vizes táptalajban tenyésztjük, előnyösen aerob körülmények között (például rázott tenyészetben, süllyesztett tenyészetben, stb.) A táptalaj előnyös szénforrásai a szénhidrátok, például glükóz, szacharóz, laktóz, glicerin, keményítő, dextrin, stb. További szénforrás lehet a maltóz, D-trehalóz, inozit, inulin, szalicin, stb. Előnyös nitrogénforrás az élesztőkivonat, pepton, sikérliszt, gyapotmagliszt, szójaliszt, kukoricalekvár, száraz élesztő, búzacsíra, toll-liszt, földimogyoró-liszt, stb., valamint a szervetlen és szerves nitrogénvegyületek, úgy mint az ammóniumsók (például ammónium-nitrát, ammónium-szulfát, ammónium-foszfát, stb.), karbamid, aminosavak, stb. A szén- és nitrogénforrásoknak, noha előnyösen kombinálva használjuk őket, nem szükséges, hogy tiszta állapotban legyenek, minthogy a kevésbé tisztított anyagok nyomokban növekedési faktorokat és kívánt menynyiségű ásványi tápanyagokat is tartalmaznak. Ha szükséges, ásványi sókat — például nátrium- vagy kalcium-karbonátot, nátrium19 vagy kálium-foszfátot, nátrium- vagy kálium-kloridot, nátrium- vagy kálium-jodidot, magnéziumsókat, rézsókat, kobaltsókat, stb. — is adhatunk a táptalajhoz. Ha szükséges — különösen, amikor a tenyészet erősen habzik — habzásgátlókat, például folyékony paraffint, növényi olajat, ásványi olajat vagy szilikont adhatunk a tenyészethez. Az FR-900520 és az FR-900523 nagy menynyiségben való előállításához előnyösen süllyesztett tenyészetet használunk. Kis menynyiség előállításához használhatunk rázott vagy felületi tenyészetet lombikban vagy más edényben. Amennyiben a tenyésztést nagy fermentorokban végezzük, előnyös oltóanyagként vegetatív állapotban levő tenyészetet használni, hogy ezzel elkerüljük az FR-900520 és az FR-900523 anyagok termelésekor a „lag“ fázist. Kívánatos tehát először egy viszonylag kis mennyiségű táptalajt a mikroorganizmus spóráival vagy micéliumaival beoltani és azon tenyészteni, majd az így kapott vegetatív tenyészetet oltóanyagként sterilen átvinni a nagyobb fermentorba. A vegetatív oltóanyag táptalaja megegyezik az FR-900520-at és az FR-900523-at termelő tenyészetnél használt táptalajjal vagy eltérhet attól. A tenyészet kevertetését és levegőztetését különféle módon oldhatjuk meg. Kevertethetjük a tenyészetet propelleres keverőlapátokkal vagy hasonló mechanikai berendezéssel, a fermentor forgatásával vagy rázatásával, különféle szivattyú berendezésekkel vagy steril levegőnek a táptalajon való átáramoltatásával. A levegőztetést steril levegőnek a fermentleven történő átáramoltatásával végezzük. A fermentálást általában 20 és 40°C között, előnyösen 25-35°C hőmérsékleten végezzük, 50-150 óra alatt, ami a fermentációs körülményektől és a méretektől függően változhat. Az FR-900520 és/vagy az FR-900523 anyagok fermentléből való kinyerésénél a bioaktív anyagoknál általánosan ismert módszereket alkalmazhatjuk. Az FR-900520 és FR-900523 anyagok főként a mycéliumban találhatók, ezért a szűréssel vagy a fermentlé centrifugálásával elkülönített micéliumból nyerhetjük azokat a szokásos eljárásokkal, mint amilyen a csökkentett nyomáson történő betöményítés, fagyasztva szárítás, megfelelő oldószerrel történő extrahálás, pH beállítás, megfelelő gyantákkal (anion vagy kation cserélő, nem ionos adszorpciós gyanták, stb.) való kezelés, alkalmas adszorbenseken (aktív szén, meta-kovasav, szilikagél, cellulóz, alumínium-oxid, stb.) történő megkötés, kristályosítás, átkristájyosítás, stb. Az FR--900520 és az FR-900523 anyagok elválaszthatók oly módon, hogy a két vegyületet tartalmazó anyagot megfelelő oldószerrel, például etil-acetáttal, n-hexánnal, stb. extraháljuk, majd a nyert oldatot például szili-20 11 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
