195250. lajstromszámú szabadalom • Eljárás triciklusos makrolidok előállítására
1 A találmány új, gyógyászati aktivitással rendelkező (1) általános képlett! vegyületek előállításával foglalkozik, mely vegyületek gyógyászati hatása főleg immunszupreszszív hatás és antimikrobiális aktivitás. A találmány tárgya eljárás olyan új vegyületek fermentációs úton történő előállítására, melyek alkalmasak a szervezet átültetéssel szembeni ellenállásának, a csontvelőátültetés kiváltotta „graft-versus-hos“ betegségen, autoimmun betegségeknek, fertőző betegségeknek stb. kezelésére vagy megelőzésére. A találmány szerinti eljárással új, FR-900506, FR-900520, FR-900523 és FR-900525 jelű anyagokat elsőként izoláltuk tiszta állapotban a Streptomyces nemhez tartozó új törzsek fermentleveiből. Vizsgálataink során megállapítottuk az FR-900506, FR-900520, FR-900523 és FR-900525 anyagok kémiai szerkezetét, és kidolgoztuk e vegyületek előállítási módját. A találmány szerinti eljárással előállítható új vegyületek szerkezetét az (I) általános képlettel ábrázoljuk, ahol R3 jelentése metil-, etil- vagy a 11ílesöpört; n jelentése 1 vagy 2, azzal a feltétellel, hogy R3 jelentése a11 ilesöpört, ha n értéke 1. Az alábbi négy, (I) általános képletü vegyületről állapítottuk meg, hogy a találmány szerinti fermentációs eljárással előállítható: 1) FR-900506 vegyület, ahol az (I) általános képletben R3 jelentése allilcsoport, n értéke 2. 2) FR-900520 vegyület (más néven WS 7238A anyag), ahol az (I) általános képletben R3 jelentése etilcsoport, n értéke 2, 3) FR-900523 vegyület (más néven WS 7238B anyag), ahol az (I) általános képletben R3 jelentése metilcsoport, n értéke 2, 4) FR-900525 vegyület, ahol (I) általános képletben R3 jelentése allilcsoport, n értéke 1. Nyilvánvaló, hogy a találmányban szereplő (I) általános képletü vegyületek egy vagy több konformer vagy sztereoizomer pár alakjában létezhetnek; ilyenek az asszimmetríás szénatom(ok) és kettős kötés(ek) jelenlétéből adódó optikai és geometriai izomerek. A találmány szerinti eljárás során tehát az (I) általános képletü vegyületeket fermentációs úton, azaz a Streptomyces nemhez tartozó mikroorganizmusok fermentálásával állítjuk elő. Az alábbiakban részletesen ismertetjük az (1) általános képletü vegyületek előállítását. A fermentációs eljárás során az FR-900506 FR-900520, FR-900523 és FR-900525 anyagokat olyan, a Streptomyces nemhez tartozó mikroorganizmusokkal történő fermentálással állítjuk elő, melyek FR-900506, FR-900520, FR-900523 és/vagy FR-900525 anyago (ka) t termelnek. Ilyen Streptomyces törzsek 2 2 a Streptomyces tsukubaensis 9993 és a Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensís 7238. Az FR-900506, FR-900520, FR-900523 és az FR-900525 anyagokat termelő mikroorganizmusokat az alábbiakban részletesen ismertetjük. A) Az FR-900506, FR-900520 és az FR-900525 anyagok előállítására az FR-900506, FR-900520, és/vagy FR-900525 anyagokat termelő Streptomyces tsukubaensis 9993 törzset használjuk. A Streptomyces tsukubaensis 9993 törzset újabban izolálták Japánban a Toyosato-chonál, Tsukuba-gun, fbaraki Prefecture, gyűjtött talajmintából. Az újonnan izolált Streptomyces tsukubaensis 9993 liofilezett törzs a Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technoiogy-nál van letétbe helyezve (No. 1-3, Higashi 1-chome, Yatabemachi Tsukuba-gun, Ibaraki Prefecture, Japán) a FERM P-7886 letétszámon (letétbe helyezés ideje: 1984. október 5.) mely 1985. október 19-én a Budapesti Egyezmény alapján át lett alakítva FERM BP-927 letétszámmá. A találmány oltalmi köre nem korlátozódik az itt leírt, FR-900506, FR-900520 és/vagy FR-900525 anyagot termelő mikroorganizmusra, melyet csak szemléltető céllal mutatunk be. A találmány oltalmi köre kiterjed mindazokra a mutánsokra is, melyek FR-900506, FR-900520 és/vagy FR-900525 anyag termelésére képesek, beleértve a leírt mikroorganizmus természetes és mesterséges — melyek a szokásos eljárásokkal, például röntgen besugárzással, ultraibolya besugárzással, N-metil-N’-nitro-N-nitrozo-guanidines, 2-amino-purinos kezeléssel, stb. állíthatók elő — mutánsait. A Streptomyces tsukubaensis 9993 törzset a következők szerint jellemezhetjük: 1. ) Morfológiai leírás. A rendszertani vizsgálatokhoz Shirling, E.B. és Gottlieb D. módszerét alkalmazzuk. („Methods for characterization of Streptomyces species.“ International Journal of Systematic Bacteriology, 16, 313-340, (1966)). A morfológiai vizsgálatokat zablisztes agaron, élesztő és malátakivonatos agaron, szervetlen sókat és keményítőt tartalmazó agaron 30°C-on tenyésztett, 14 napos tenyészeteken végezzük, fény és elektromikroszkóppal. Az érett sporoforok „rectiflexibile“ típusúak, a spórafüzér 10-50 vagy ennél több spórából áll. A spórák nyújtottak vagy hengeresek, elektronmikroszkóppal meghatározva, méretük 0,5-0,7 x 0,7-0,8 pm. A spórafelszin sima. 2. ) A tenyészet jellemzésére tízfajta táptalajt használunk, melyeket Shirling és Gottlieb (lásd a fent említett cikk), illetve Waksman (Waksman, S.A., „The actinomycètes“ 2. kötet Classification, identification and description of genera and species. The Williams and Wilkins Co., Baltimore, 1961.) ismertet. 195250 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
