195248. lajstromszámú szabadalom • Eljárás higromicin B és G418 antibiotikumokkal szembeni rezisztenciát meghatározó rekombináns dezoxi-ribonukleinsav klónozó vektorok és ezek eukarióta és prokarióta transzformánsai előállítására
195248 terméket Bglll restrikciós enzimmel kezelt pSV5 gpt plazmiddal ligáljuk, vagy d) a 3b) igénypont szerint előállított 2,75 kb nagyságú fragmenshez Bglll kapcsolókat kapcsolunk és a kapott terméket Bglll restrikciós enzimmel kezelt pSV5 gpt plazmiddal ligáljuk. (Elsőbbsége: 1981.06.22j 7. Eljárás a higromicin B és G418 antibiotikumok egyikével vagy mindkettővel szembeni rezisztenciát mutató, a 3a) igénypont szerint előállított restrikciós fragmens vagy származékai bármelyikét tartalmazó, prokarióta és eukarióta sejtekben funkcionáló alábbi plazmidok: a) pL0314 és pL0315, b) pL0316 és pL03!7, c) pL0318 és pL0319, d) pL0321 és pLO320, e) pKC273 és f) pL0378 előállítására, azzal jellemezve, hogy a) az 5c) igénypont szerint előállított pKC259 plazmídot és a pSV5 gpt plazmidot külön-külön Bglll restrikciós enzimmel kezeljük és a kapott fragmenseket egymással ligáljuk, vagy b) az 5b) igénypont szerint előállított pKC257 plazmidot Sacl-el kezeljük, a lineáris termék végeihez Bglll kapcsolókat kapcsolunk és a kapott terméket Bglll restrikciós enzimmel kezelt pSV5 gpt plazmiddal ligáljuk, vagy c) az 5d) igénypont szerint előállított pKC261 plazmidot SacI restrikciós enzimmel kezeljük, a lineáris termék végeihez Bglll kapcsolókat kapcsolunk és a kapott terméket Bglll restrikciós enzimmel kezelt pSV5 gpt plazmiddal ligáljuk, vagy d) az 5e) igénypont szerint előállított pKC275 plazmidot SacI restrikciós enzimmel kezeljük, a lineáris termék végeihez Bglll kapcsolókat kapcsolunk és a kapott terméket Bglll restrikciós enzimmel kezelt pSV5 gpt plazmiddal ligáljuk, vagy e) az 5c) igénypont szerint előállított pKC259 plazmidot BamHI, majd Sáli restrikciós enzimekkel kezeljük, ugyanakkor pYEp24 plazmidot BamHI, majd Sáli restrikciós enzimekkel kezelünk és a keletkezett frakciókat egymással ligáljuk, vagy f) az 5f) igénypont szerint előállított pKC264 plazmidot és pBR322 plazmidot külörv -külön PstI restrikciós enzimmel kezelünk és a kapott fragmenseket egymással ligáljuk. (Elsőbbsége: 1982.03.26J 8. Eljárás a higromicin B és G418 antibiotikumok egyikévei vagy mindkettővel szembeni rezisztenciát meghatározó, egy vagy két különböző strukturgént és az ehhez tartozó szabályozó szekvenciát tartalmazó DNS szekvenciákkal rendelkező plazmidokat'tartalmazó prokarióta és eukarióta sejtek előállítására, azzal jellemezve, hogy a) valamely prokarióta sejtet a 2—6. igénypontok bármelyike szerint előállított plazmiddal transzformálunk, vagy 35 b) valamely eukarióta sejtet a 6. igénypont szerint előállított valamely plazmiddal transzformálunk. (Elsőbbsége: 1981.06.22.) 9. A 8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy prokarióta sejtként E. coli K12 sejtet alkalmazunk. (Elsőbbsége : 1981.06.22. ) 10. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy prokarióta sejtként E. coli K12 BE827 törzset alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1981.06.22J 11. A 8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy eukarióta sejtként Mouse Ltk~ sejteket alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1981.06.22. ) 12. Eljárás a higromicin B és G418 antibiotikumok egyikével vagy mindkettővel szembeni rezisztenciát meghatározó, egy vagy két különböző strukturgént és az ehhez tartozó szabályozó szekvenciát tartalmazó DNS szekvenciákkal rendelkező plazmidokat tartalmazó prokarióta és eukarióta előállítására, azzal jellemezve, hogy a) valamely prokarióta sejtet az 5. vagy 7. igénypont szerint előállított bármely plazmiddal transzformálunk, vagy b) valamely eukarióta sejtet a 7. igénypont szerint előállított valamely plazmiddal transzformálunk. (Elsőbbsége: 1982.03.26.) 13. A 12. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy prokarióta sejtként E. coli K12 sejteket alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1982.03.26.) 14. A 13. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy prokarióta sejtként E. coli K12 BE783, E. coli KI2 BE827 vagy E. coli K12 BE 1041 törzseket alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1982.03.26.) 15. A 13. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy eukarióta sejtként Mouse Ltk- sejtet vagy Saccharomyces cerevisiae sejteket alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1982.03.26.) 16. Eljárás a 2. vagy 6. igénypont szerint előállított plazmidok fenntartására és stabilizálására, azzal jellemezve, hogy a plazmidot valamely gazdasejtbe transzformáljuk és a transzformált gazdasejtet higromicin B és/ /vagy G418 antibiotikum jelenlétében tenyésztjük és a túlélő sejteket szelektáljuk. (Elsőbbsége: 1981.06.22.) 17. A 16. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a 2. vagy 6. igénypont szerint előállított plazmidot valamely prokarióta gazdasejtbe transzformáljuk. (Elsőbbsége: 1981.06.22) 18. A 17. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy prokarióta gazdasejtként E. coli KI2 sejtet alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1981.06.22. ) 19. A 18. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy prokarióta gazdasejtként E. coli K12 BE827 törzset alkalmazunk. (Elsőbbsége: 198I.06.22J 20. A 16. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a 6. igénypont szerint előállított valamely plazmidot eukarióta gazda36 19 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
