195247. lajstromszámú szabadalom • Eljárás herpesz vírusokra fajlagos immunológiai anyagok előállítására és kimutatásukra
195247 monoklonális antitesteket (IOO—200 p l, amely 150—600 ,ug IgC-t képvisel) kötünk Sepharose 4B oszlopra és az oszlopot felhasználjuk HSV—l el fertőzött sejtek citoplazmás extraktumainak adszorbeálására (100 pl extraktum 37°C hőmérsékleten 2 órán át inkubálva). Az immunoadszorbenseket tízszer mossuk pufferral és jódozott második antitestet (kb. 250 000 cpm) adunk hozzá. Erőteljes mosás után az oszlopot gamma-számlálóban számlálásnak vetjük alá. Elméletileg mivel antitestek fölöslegét alkalmazzuk az oszlopon, azonos típusú jelzett antitest nem kötődhet az oszlophoz. Az összes antitest között, amelyet jelzett partnerjeik ellen vizsgálunk, a DL—6 mutatja a legnagyobb kapacitást a gD—1-hez való kötődésben, jelzett partnerének kiszorításával. A megelőző bemutató példák egér lép- és tumorsejtek standard, kémiailag elősegített fúziójának segítségével képzett monoklonális antitest-termelő hibridóma sejtvonalakra vonatkoztak. Nyilvánvaló azonban, hogy hibridóma sejt termelő technikák széles választéka alkalmazható különböző emlős fajok sejtjeihez a találmány szerinti hibridóma sejtvonalak előállítására, amelyek gD—1-re, gD—2-re és szerkezetileg rokon anyagokra fajlagosan immunológiailag reaktiv antitestek termelésére képesek, a szerkezetileg rokon anyagok közé beleértve az RNHPEDPEDS ALLCOR’ aminosav-szekvenciát, ahol R és R’ azonos vagy különböző aminosav-gyököket jelentenek, vagy R jelentése hidrogénatom, vagy R’ jelentése hídroxilcsoport. Speciálisan vonatkozik a jelen találmány azokra a hibridóma sejtvonalakra, amelyek ember, patkány vagy más emlős fajok sejtanyagainak genetikái fúziójával képződnek (vagy ezek fajok közti keverékeivel), a fúziót akár kémiai, akár elektromos közvetítéssel végezve, és akár teljes sejttel, akár ezek genetikailag fontos töredékeivel végezve. Hasonlóképpen, bár a megelőző bemutató példákban a hibridómák kifejlesztésében alkalmazott immunogén természetes forrásokból származó, affinitás-kromatográfiával tisztított gD —1 volt, egy sor más immunogén is szolgálhat ennek megfelelő helyettesítésére. Jellegzetes helyettesítések lehetnek erre a célra a gD—2, valamint a gD—1 és gD—2 polipeptid másolatok natív és denaturált formában, amely másolatok rekombináns módszerekkel készülnek megfelelő mikrobiológiai gazdaszervezetekben, pl. baktériumokban, élesztőkben és emlős sejtekben megfelelő tenyészetben, és amelyek lehetnek glikozilezett vagy nem glikozilezett formában, további amino- vagy karboxi-terminális aminosavakkal vagy azok nélkül. További előnyös helyettesítések lehetnek azok a szintetikus peptidek, amelyek a gD—1 vagy gD—2 266—287. helyzeteinél jelen levő aminosavgyök-szekvenciák egészének vagy immunológiailag fontos részének másolatai, ilyen pl. az RNHPEDPED SALLCOR’ folyamatos szekvencia, ahol 8 13 R és R’ azonos vagy különböző aminosav-gyököket jelent, vagy R jelentése hidrogénatom vagy R’ jelentése hídroxilcsoport. Számos módosítás és változat képzelhető el a fentebb bemutatott példákban leírtakhoz képest azok számára, akik a szakterületen jártasak, következésképpen nem a bemutatásra szánt példák, hanem az ez után következő igénypontok szabják meg a találmány oltalmi körét. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás 1. és 2. típusú Herpes simplex vírusra fajlagos monoklonális antitestet termelő hibridómák előállítására és kiválasztására, azzal jellemezve, hogy tumor sejteket és gD—1 vagy gD—2 glikoproteinnel hiperimmunizált rágcsálók lépsejtjeit fuzionálva hibridóma sejteket állítunk elő, és kiválasztjuk azokat a hibridóma sejteket, amelyek 1. és 2. típusú Herpes simplex vírus D-glikoproteinjéhez, valamint PELA(vagy V)PEDPEDSALLEDPV(vagy A)GTVA(vagy S) aminosavszekvencia részének vagy egészének, de legalább PEDPEDSALL aminosavszekvenciának a másolatát jelentő aminosavszekvenciájű fehérjeszerű anyagikhoz kötődni képes antitestet termelnek. 2. Eljárás 1. és 2. típusú Herpes simplex vírusra fajlagos monoklonális antitestek előállítására, azzal jellemezve, hogy tumor sejteket és gD—1 vagy gD—2 glikoproteinnel hiperimmunizált rágcsálók lépsejtjeit fuzionálva hibridóma sejteket állítunk elő, kiválasztjuk azokat a hibridóma sejteket, amelyek 1. és 2. típusú Herpes simplex vírus D-glikoproteinjéhez, valamint PELA (vagy V)PEDPEDSALLEDPV (vagy A)GTVA(vagy S) aminosavszekvencia részének vagy egészének, de legalább PEDPEDSALL aminosavszekvenciának a másolatát jelentő aminosavszekvenciájú fehérjeszerű anyagokhoz kötődni képes antitestet termelnek, és a hibridóma sejtek által termelt monoklonális antitesteket elválasztjuk. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás 1. és 2. típusú Herpes simplex vírus D-glikoproteínjéhez, valamint PELLA(vagy V)PEDPEDSALLEDPV(vagy A)GTVA(vagy S) aminosavszekvencia részének vagy egészének, de legalább PEDPEDSALL aminosavszekvenciának a másolatát jelentő aminosavszekvenciájú fehérjeszerű anyagokhoz fajlagosan kötődni képes monoklonális antitestek előállítására, azzal jellemezve, hogy ATCC HB 8606 hibridóma sejtvonal által termelt monoklonális antitesteket választunk el. 4. Immunológiai eljárás 1. vagy 2. típusú Herpes simplex vírus D-glikoproteinjének vagy immunológiailag aktív fragmenseinek 14 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
