195247. lajstromszámú szabadalom • Eljárás herpesz vírusokra fajlagos immunológiai anyagok előállítására és kimutatásukra
195247 Röviden összefoglalva a gD--1 és gD—2 érett formája az előrejelzés szerint 369, illetve 368 aminosavból áll, a gD—2-nél „hiányzik“ egy gyök, amely a gD—I 304. gyökének felel meg, és mintegy 85% homológja áll fönn a két szekvencia között. [Lásd még Lasky és munkatársai: DNA, 3, 23—29 ( 1984) és Rawls és munkatársai: J. Virol. 51, 263—265 (1984)]. A HSV gD—1 és gD 2 jellemzésében kutatásokat folytattak ezen anyagok antigén determinánsai elhelyezkedésének meghatározására fajta-specifikus és általános típusú monoklonális anyagok alkalmazása segítségével [Eisenberg és munkatársai: J. Virol. 41, 1099—1104 (1982); Cohen és mutkatársai: J. Virol. 49, 102—108 (1984); Eisenberg és munkatársai: J. Virol. 49, 265—268 (1984) és az ezekben található további referenciák]. Ennek a munkának lényegében kettős célja az volt, hogy kiderítsen egy vagy több determinánst, amely stimulálja a semlegesítő antitestek termelését HSV gazdaszervezetben, és azonosítson olyan antitest anyagokat, amelyek az ilyen immunológiailag jelentős anyagok kimutatásában, mennyiségi mérésében és affinitásos tisztításában megfelelően használhatók. A szakterületen a fentebb jelzett fejlődés ellenére továbbra is igény van a gD—í-nek, gD—2-nek és szerkezetileg rokon anyagoknak, pl. a gD—1 és gD—2 fragmenseknek és/vagy anológoknak természetes és rekombináns forrásaikból való kimutatásában, menynyiségi elemzésében és affinitás kromatográfiával való izolálásában alkalmazható antitest-anyagokra. A találmány szerint olyan új antitest anyagokat állítunk elő, amelyek egyedi, többirányú immunreaktivitást mutatnak a I. és 2. típusú Herpes simplex vírus D-glikoproteint (HSV gD—1 és gD—2) és lényegében rokon anyagait illetően; valamint a gD— 1, gD—2 és szerkezetileg rokon anyagaik kimutatásához, mennyiségi elemzéséhez és aífinitás-kromatográfiával történő izolálásához használhatók. A találmány tárgya tehát eljárás 1. és 2. típusú Herpes simplex vírusra fajlagos monoklonális antitestet termelő hibridómák előállítására és kiválasztására. A találmány értelmében tumor sejteket és gD—1 vagy gD—2 glikoproteinnel hiperimmunizált rágcsálók lépsejtjeit fuzionálva hibridómákat állítunk elő, és elkülönítjük azokat a hibridómákat, amelyek 1*. és 2. típusú Herpes simplex vírus D-glikoproteinjéhez, valamint PELA(vagy V)P£DPEDSALLEDPV(vagy A)GTVA(vagy S) aminosavszekvencia részének vagy egészének, de legalább PEDPEDSALL aminosavszekvenciának a másolatát jelentő aminosavszekvenciájú fehérjeszeríí anyagokhoz kötődni képes antitestet termelnek. A találmány tárgya továbbá eljárás l. és 2. típusú Herpes simplex vírusra fajlagos monoklonális antitestek előállítására. A talál3 mány értelmében tumor sejteket és gD—1 vagy gD—2 glikoproteinnel hiperimmunizált rágcsálók lépsejtjeit fuzionálva hibridómákat állítunk elő, elkülönítjük azokat a hibridómákat, amelyek 1. és 2. típusú Herpes simplex vírus D-glikoproteinjéhez, valamint PELLAtvagy V) PEDPEPDS ALLE DPV( vagy A)GTVA(vagy S) aminosavszekvencia részének vagy egészének, de legalább PEDPEDSALL aminosavszekvenciának a másolatát jelentő aminosavszekvenciájú fehérjeszerű anyagokhoz kötődni képes antitestet termelnek, és a hibridómák által termelt monoklonális antitesteket elkülönítjük. A találmány szerint I. vagy 2. típusú Herpes simplex vírus D-glikoproteinjének, vagy ezek immunológiailag aktív fragmenseinek vagy analógjainak mennyiségét úgy határozzuk meg, hogy a szelektív immunológiai reakcióban egy a fentiekben előállított monoklonális antitestet alkalmazunk. A fentiekben előállított monoklonális antitesttel képzett immuno-adszorbenssel 1. vagy 2. típusú Herpes simplex vírus D-glikoproteinjét vagy más, olyan fehérjeszerű anyagokat, amelyek a PELA(vagy V) PEDPEDSALLEDPV (vagy A)GTVA(vagy S) aminosav szekvencia részét vagy egészét tartalmazzák, affinitásos módszerrel tisztíthatunk. A találmány szerinti antitest anyagok jellemzője, hogy közönséges típusú kötéssel kötődnek mint gD—1-hez, mind gD—2-hez, amelyek mind természetes, mind denaturált állapotban lehetnek. Ez azt jelzi, hogy az antitestek ugyanahhoz vagy közel ugyanahhoz az epitóphoz kötnek a két glikoproteinen belül, és hogy a kötött epitópok lineárisok, és nem konformációs epitópok. A találmány szerinti antitest anyagok további jellemzője, hogy reverzibilis immuno-kötéssel kötődnek olyan fehérje-szerű anyagokhoz, amelyek tartalmazzák az aminosav gyökök azon folyamatos szekvenciáinak egészét vagy egy immunológiailag jelentős részét, amely a gD—I és gD—2 előrejelzett szekvenciáinak 266. és 287. gyökei közt terül el, vagyis a PELA(vagy V) PEDPEDSALLEDPV (vagy A) GTVA(vagy S) szekvenciát. A találmány szerinti antitest anyagok előnyösen hibridóma sejtvonalak által termeit monoklonális antitestek. A találmány szerint előállított antitestekre példaként az ATCC HB8606 egér-egér hibridóma sejtvonal által termelt monoklonális antitesteket írjuk le, mely sejtvonalat 1984. október 26-án helyeztük letétbe az American Type Culture Collection-nál (12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852), az USA Szabadalmi és Védjegy Hivatal mikroorganizmusok letétbe helyezésével kapcsolatos követelményeivel összhangban. A találmány szerint előállított egyik előnyös antitest a „DL—6“-nak nevezett IgG 4 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
