195246. lajstromszámú szabadalom • Kóliform baktériumok szelektív tenyésztésére alkalmas szintetikus táptalaj
195246 Az anionok kiválasztásánál arra is ügyelnünk kell, hogy a táptalaj szelektivitása a bevitt anionok révén ne csökkenjen. A szervetlen anionokon (klorid, szulfát, nitrát, foszfát, karbonát stb.) kívül szerves anionokat, például rövidszénláncú karbonsav-anionokat, előnyösen formiát- vagy acetátiont alkalmazhatunk. A találmány szerinti táptalaj — természetesen korlátozott mennyiségben — további szervetlen ionokat is tartalmazhat. A nitrátion a sejtlégzésben játszik szerepet, a kálium-, nátrium- és kloridion az izotónia fenntartásához szükséges, a szulfátionban jelenlévő ként a kéntartalmú aminosavak szintéziséhez használja fel a baktérium. A találmány szerinti táptalaj könnyen, gyorsan előállítható a szilárd komponensek összemérésével, vízben való oldásával, majd az oldat sterilizálásával. Az oldáshoz nem szükséges desztillált vizet használni, csapvíz is megfelel. A hagyományos táptalajok (brillantzöld-laktóz-epe leves) esetén a sterilizálást 1 bar túlnyomáson végezzük, ezen a hőfokon azonban a laktóz kismértékben karamellizálódik. Az új táptalaj használata révén ezt elkerülhetjük, a találmány szerinti-táptalaj sterilezése 100°C-on való gőzöléssel megoldható, mivel a fehérjék baktériumvédő hatása — mivel fehérjék a táptalajban nincsenek jelen — nem érvényesül. A hatékonyság ellenőrzése céljából az X-levest összehasonlítottuk a hazai és nemzetközi szabványokban is ajánlott brillantzöld-laktózepe levessel. Első lépésben mindkét táptalajra kóliform (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes) baktériumokat oltottunk. Mindhárom mikroba mindkét táptalajon jól fejlődött, és 48 óra elteltével mindkét táptalaj esetén gázfejlődést tapasztaltunk. A második lépésben a nem kóliform Gram-negatív baktériumok közül Pseudomonas aeruginosa és Proteus mirabilis törzsekkel oltottuk be a táptalajt. 48 óra múlva ezek a brillantzöld-laktóz-epe levesben elszaporodtak, de gáztermelést nem okoztak. Az X-levesben fejlődés egyáltalán nem volt észlelhető, még akkor sem, ha az inkubálást több hétre meghosszabbítottuk. A harmadik lépésben a Gram-pozitiv baktériumok közül Staphylococcus aureus, egy Micrococcus törzs és Bacilus cereus került beoltásra. A brillantzöld-laktóz-epe levesben mindegyik törzs zavarosodást okozott gázképződés nélkül. Az X-levesben egyáltalán nem volt szaporodás. A két táptalajt a vizsgálatok során okozott matematikai szórás szempontjából is megvizsgáltuk. Mindkét táptalajon meghatároztuk a kóliform baktériumok számát a legvalószínűbb csíraszám (MPN) módszerének alkalmazásával. A vizsgált minta minden hígításá3 ból 2X3—3 párhuzamos leoltást végeztünk mindkét táptalajra. Először a Klebsiella pneumoniae és az Escherichia coli (33001) törzseket használtuk modellként. A modellkísérletek alkalmazásával kizártuk a vegyes mikroflóra összetétel esetén jelentkező bonyolult kölcsönhatásokat (szinergizmus, antagonizmus). Az eredményeket matematikai-statisztikai módszerek segítségével értékeltük. A vizsgálat eredményeit az 1. ábra mutatja. A következő lépésben igen vegyes mikroflórájú camembert (Bakony, illetve Tihany) sajtok kóliform-számait vizsgáltuk táptalajaink segítségével. A vizsgálat eredményeit a 2. ábra mutatja. A fenti vizsgálatok alapján megállapítható, hogy a brillantzöld-laktóz-epe leves és az X-leves érzékenysége egyforma, a meghatározások metodikai hibája is statisztikailag egyezik. Az új táptalaj előnyei a következők: 1) Nem szükséges gátlóanyag alkalmazása, így nincs tökéletlen gátlás, és a kimutatandó mikroba fejlődése sem gátolt. 2) Nagy fokban specifikus. 3) Értékelése — főleg specifitása miatt — egyszerű. 4) Nem kell az egyre dráguló és bizonytalan összetételű gátlóanyagok beszerzésével és betitrálásával foglalkozni. 5) Mivel a levesben egyéb baktériumok nem fejlődnek, ezek antagonista hatása nem gátolja a kóliformokat. 6) Teljesen átlátszó volta miatt értékelése könnyű és gyors. 7) A diagnózis pontosításához nem kell továbboltást végezni, ezért a vizsgálat ideje lerövidül. 8) Előállítása nagyon egyszerű, csak a sók feloldásából áll. 9) Gyorsan elkészül, mert nem kell szűrni sem. 10) Sterilezéséhez kevesebb hőbehatás is elég a) a szervetlen sók csíratartalma kisebb, mint a peptonoké, b) nem tartalmaz fehérjéket, amelyek protektiv hatást fejtenének ki a baktériumokra. 11) Könnyen előállítható por alakban is. 12) összetétele standard, bármikor és bárhol tökéletesen reprodukálható. 13) Teljesen bizonyosak lehetünk abban, hogy nem tartalmazhat antibiotikumot (epe). 14) Igen sokáig tárolható, mert nem kell fehérjebomlástól tartani, és a' gátlóanyag sem koncentrálódik be. (Kísérletünkben 6 hónapig szobahőmérsékleten tároltuk az X-levest, és ezután is kifogástalanul működött.) Találmányunkat az alábbi példákkal illusztráljuk, anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlátoznánk. 1. példa  következő összetételű szintetikus táptalajt állítjuk elő: 4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
