195211. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 5-alkil-1-fenil- 2-(piperazino-alkil)-pirazolin-3-on-származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
195211 37°C-on (vízfürdő) inkubáljuk. A nemkötött IgE-t eltávolítása céljából a hízósejteket 2 ml foszfáttal pufferolt nátrium-klorid-oldattal mossuk, centrifugáljuk és a felül elhelyezkedő folyadékot elöntjük. A hízósejteket 1 percen át 37°C-on a teszt-vegyület foszfáttal pufferolt nátrium-klorid-oldattal készített oldatával (200 pl) inkubáljuk. A kontroli-csoport állatait azonos mennyiségű, azonban teszt-vegyületet nem tartalmazó nátrium-klorid-oldattal inkubáljuk. Az anafilaktikusan előidézett hisztamin-felszabadítás előidézéséhez az ily módon kezelt hízósejtekhez ovoalbuminnak foszfáttal pufferolt nátrium-klorid-oldattal készített, 100 pg/ml koncentrációjú oldatából 200 pl-t adunk. A reakciót 37°C-on történő 3 perces inkubálás után jégfürdőben történő gyors lehűtéssel leállítjuk. Az elegyet centrifugáljuk, a felül elhelyezkedő folyadékot dekantáljuk és a hisztamin-tartalmat további extrakció nélkül Shore módszerével spektrofotometriás úton meghatározzuk [J. pharmac. Exp. Ther. 127 (1959), 182—186.]. 11 Az alsó rész hízósejtjeiben levő maradék-hisztamin extrahálása céljából 2 ml foszfáttal pufferolt nátrium-klorid-oldattal elegyítjük és a szuszpenziót forró vízfürdőn 5 melegítjük. Ezután centrifugáljuk, a felül elhelyezkedő folyadékot dekantáljuk és a hízósejtekből extrahált maradék-hisztamint spektrofluorometriás úton meghatározzuk. 10 Mindegyik mintában a felszabadított hisztamin mennyiségét a teljes hisztamin mennyiségének (azaz a felszabadított és a hízósejtekben visszamaradt hisztamin mennyiségének összege) %-ában fejezzük ki. EC50-értéknek a felhasznált teszt-vegyület oldatának azon moláris koncentrációját tekintjük, amely a hisztamin felszabadulását a kontroli-csoporthoz viszonyítva 50%-kal gátol j a. 20 Az I. és II. táblázatban a fenti teszt-módszerek szerint kapott eredményeket foglaljuk össze. A teszt-vegyületeket a kémiai előállítási példa számára való hivatkozással azorosítjuk. 12 1. táblázat Tesztvegyület; a példa száma Kután allergiás reakciókkal szemben patkányon kifejtett gátló hatás, ED50 mg/kg p.o. passzív hisztamin által kután ana- előidézett filaxia anafilaktoid reakció szerotonm áltál kiváltott anafilaktikus reakció Akut . . f toxieitas mg/kg i.p. egéren 1. 2,5 4,7. 2,6 117 2. 1,9 1,75 2,7 90 4. 3,9 7,98 5,9 130 7. 6,6 7,9 13,0 178 1 1 . 4,65 10,1 10,2 108 13 . 2,94 5,48 1,87 96 15. 1,9 4,4 1,7 90 17. 5,0 12,6 10,8 342 18. 4,7 6,6 6,2 205 21 . 7,1 5,1 8,3 252 23. 7,85 4,7 5,8 168 26. 6,75 6,3 7,8 72,5 38. 3,18 3,88 5,54 93 39. 5,7 9,7 2,5 91,5 43. 2,45 5,79 3,25 44. 5,4 3,15 8,9 170 45. 6,3 11 8,0 240 46. 6,3 2,8 8,0 101 47. 5,96 6,8 6,8 190 49. 4,9 10,6 3,59 96 54 . 4,45 5,46 0,52 53,3 55. 7,26 11,86 11,80 135 56. 5,7 3,85 6,29 >350 8
