194915. lajstromszámú szabadalom • Eljárás teikoplanin a2 faktor 1 komponensének teikoplanin a2 faktor 3 komponensévé való átalakítására

5

194915

reakcióterméket ülepítjük, visszaoldjuk vízben, a tiszta oldathoz néhány csepp ásványi savat adunk, erős bázissal beállítjuk a pH-t, körülbelül 6,0—6,5 közé, majd a terméket kicsapószer hozzáadásával ülepítjük.

Erős bázisként használhatunk alkálifém-hidroxidokat, például nátrium- vagy kálium-hidroxidot, nátrium-karbonátot és ammóniát. Előnyös erős bázis a nátrium-hidroxid vizes oldata. Az ülepítésnél kicsapószerként például etilétert, kloroformot, benzolt, hexánt, aceto-nitrilt, etil-acetátot, acetont és szén-tetrakloridot, etil-étert alkalmazunk. Előfordulhat, hogy ilyen módon eljárva, olyan szuszpenziót kapunk, melynek szűrése nehézséget okoz. Szűrhető oldatot nyerünk, ha a termékhez vízzel nem elegyedő oldószert (illetve kicsapószert) adunk, mint például butanolt, hogy elválasszuk a vizes és szerves rétegek felületét.

Más eljárás szerint a reakcióterméket a vizes oldatból pH 6,0—6,5-re való beállításával nyerjük ki „kisózási” eljárással. Ez a módszer, mint ismeretes, alkalmas só hozzáadásával, tipikusan ammónium-szulfáttal, a terméket tartalmazó oldat ionerősségét változtatja meg, és a termék emiatt ülepedik ki. Tehát ebben az esetben is, hasonlóan az előbb említett útépítési eljáráshoz, a termék (teikoplanin A2 3 komponens) ülepítését megkönnyítjük kevés tiszta teikoplanin A2 3 komponens vagy más alkalmas elsődleges ülepítési termék hozzáadásával.

A teikoplanin A2 1 komponens fizikai-kémiai jellemzői:

Teikoplanin A2 1 komponens fehér amorf por, hevítés hatására 220°C körül sötétedni kezd, 255°C-on teljesen elbomlik. Jellemző paraméterei:

a) Korlátlanul oldható vízben pH 7,0 vagy pH 2 mellett, dímetil-formamidban, dimetil-szulfoxidban és propilén-glikolban, gyengébben oldódik metanolban és etanoiban, majdnem oldhatatlan kloroformban, benzolban, n-hexánban, aceto-nitrilben, etil-éterben, acetonban, etil-acetátban, szén-tetrakloridban;

b) ultraviola .fényben felvett abszorpciós spektrumában a következő abszorpciós maximumok vannak:

0,1 N sósavban

-Amax 278 nm (El%= 49,5)

1 cm

foszfát pufferben pH = 7,4;-Amax 278 nm (E^%= 50,0)

0,1 N nátrium-hidroxidban:-Amax 297 nm (E'*= 72,1)

Km

c) infravörös abszorpciós spektrum nujolban a következő abszorpciós maximumokat mutatja:

3700—3100, 2960—2840 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol),

1305, 1230, 1180, 1155, 1060, 1025, 970, 890, 845, 815, 720 (nujol);

d) a minta elemi analízise, előzetesen inert atmoszférában (% Aw = 8,5) 140°C körül kiszárítva, megközelítőleg a következő százalékos összetételt (átlagosan) mutatja:

szén 56,70%; hidrogén 4,90%; nitrogén 6,65%; klór 3,80%; oxigén (a különbségből számítva) 27,9%;

e) 21,2 perces visszatartási (retenciós) ír idővel a fordított fázist HPLC analizálva 5 pm ZorbaxR ODS kolumnán (4,6x xl50 mm), és B oldattal eluálva 0%-tói 50%-ig lineáris gradienssel az A oldathoz 40 perc alatt (A oldat: 25 mM NaH2P04/ /aceto-nitril (3/7) 6,0 pH értékű 0,1 N NaOH-dal pufferoiva), folyási sebesség 2 ml/perc; (nemzetközi standard: 3,5-hidroxi-toluol tu = 8,84 perc))

f) 270 MHz-n DMSO-d6-ban felvett ’H NMR spektrumban a következő jelcsoportok vannak néhány csepp D20 hozzáadásával (konc. 25 mg/0,5 mi) (TMS, mint nemzetközi standard: 6 = 0,00 ppm: 0,8—1,5 (m); 1,7—2,3 (m); 2,7—4,0 (m); 4,0— 4,7 (m); 4,8—5,8 (m); 6,2—8,1 (m),

g) só formáiban savas funkcióra képes,

h) só formáiban bázikus funkcióra képes,

i) tömeg-spektrometriás analízissel meghatározva 1875 körüli molekulatömegű, ionforrásként szilárd atom bombázással (FAB) /FAB tömegspektrométer alkalmazásával,

1. például M. Barber et al., Nature, 293, 270-75 (1981)/.

A teikoplanin A2 3 komponens fizikai-kémiai jellemzői:

A teikoplanin A2 3 komponens amorf, fehér , por, melegítés hatására 205°C-on kezd bomlani, 250°C-on teljesen elbomlik.

Jellemző paraméterei:

a) korlátlanul oldható vízben pH > 7,0-nál vagy pH > 2-nél, dimetil-formamidban, dimetil-szulfoxidban és propilén-glikolban, gyengén oldódik metil-cellulózban és glicerinben, kevéssé oldódik metanolban és etanolban; oldhatatlan kloroformban, benzolban, n-hexánban, aceto-nitrilben, etil-éterben, acetonban, etil-acetátban, szén-tetrakloridban;

b) ultraviola fényben felvett abszorpciós spektrumában a következő abszorpciós maximumok vannak:

— 0,1 N sósavban:

Amax 278 nm (E,^=49,2)

— foszfát pufferben pH 7,4:

Amax 278 nm (E^= 50,8)

— 0,1 N nátrium-hidroxidban:

Amax 297 nm (E*= 72,7)

6

5

10

15

20

25

3C

35

40

45

50

55

60

65

4