194903. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tilozin előállítására
194903 3 si sebességgel 200 liter térfogatú vízzel mossuk; a mosóvíz nem mutat aktivitást. A továbbiakban a kolonnát víznzopropil-alkohol 1:1 térfogatarányú elegyével eluáljuk és az aktivitást nem mutató 50 liter térfogatú felső rész elengedése után a 100 liter térfogatú, a kezdeti aktivitás 90%-át mutató középső eluátumot összegyűjtjük. Az eluátumot bepároljuk, majd előzetesen sóvá alakított IRA 35°^ gyantán (Rohm and Haas) adszorbeáltatjuk 20 liter/óra átfolyási sebességgel. Az ily módon kapott színtelen eluátum pH értékét 10°C hőmérsékleten vizes nátrium-hidroxid oldat adagolásával 8,5-re állítjuk és 4,5 kg nátrium-kloridot adagolunk. 35°C hőmérsékleten, 2 órán keresztül történő keverés után a kivált tilozin-bázist Buchner szűrőn keresztül szűrjük és 8 liter térfogatú pH=8,5 értékű vízzel mossuk, 45°C hőmérsékleten. Ezután 45°C hőmérsékleten az anyagot csökkentett nyomáson szárítjuk 8 órán keresztül majd a szárítást további 6 órán át magas vákuumban folytatjuk. A kitermelés az elméleti 80%-a a tílozin-bázisra vonatkoztatva; az olvadáspont 128-132°C, [a]J3 * 5=-46° (C=2 metanolban), UV max=282 nm E<”Afm=245 A tisztítási eljárást megismételtük úgy, hogy az eluáláshoz víz:aceton=l:l térfogatarányú elegyét alkalmaztuk; a leírttal azonos minőségű tilozint kapunk, azonos kitermeléssel. 2. példa Neutrális tilozin-tartarát előállítása. Az 1. példában leírtak szerint előállított tisztított tilozin-bázis 1 kg tömegű mennyiségét 3,0 liter metilalkoholban szuszpendáljuk és az oldathoz 0,066 kg borkősavat és 0,05 kg aktív szenet adunk. Szobahőmérsékleten, 30 percen keresztül történő keverés után a reakciókeveréket 0,10 kg Dicalite-n keresztül szűrjük, a szűrőlepényt 1,0 liter metanollal mossuk és a szűrletet csökkentett nyomáson (20— 25°C gőzhőmérséklet) szárazra pároljuk. Az ily módon nyert száraz, morzsalékos párlási maradékot csökkentett nyomáson 3 órán keresztül 50°C hőmérsékleten tovább pároljuk és ily módon 911,5 g tilozin-tartarátot kapunk. (98,5%-os kitermelés). Olvadáspont: 142—146°C. 3. példa Az 1. példában leírtak szerint eljárva 520 kg fermentlevet kezelünk és ily módon színtelen tiszta eluátumot kapunk. Az eluátumhoz 396 g borkősavat adunk és a pH-értéket 6,0 és 6,4-re állítjuk. Ezután 300 g aktív szenet adagolunk miközben a reakciókeveréket szobahőmérsékleten 30 percen keresztül keverjük. Dicalite-n történő szűrés után csökkentett nyomáson az oldatot 25 liter térfogatra pároljuk majd magas“vákuumot alkalmazva 4 4400 g tilozin-tartarátot kapunk. (98%-os kitermelés) . 4. példa Az 1. példában leírtak szerint eljárva 520 kg fermentlevet kezelünk a terméket tartalmazó eluátum kinyerése céljából. Az eluátumot vákuumban 70 liter térfogatra koncentráljuk és egyidejűleg a fejpárlatból az izopropanolt eltávolítjuk. Ezután 35 liter metilén-kloridot adagolunk és 20%-os vizes nátrium-hidroxid oldat adagolásával a pH-értéket 8,5-re állítjuk. 15 percen keresztül történő keverés után a szerves extraktumot leválasztjuk, csökkentett nyomáson 9,0 liter térfogatra koncentráljuk és keverés közben 30,0 liter ciklohexánt adagolunk. A reakciókeveréket 3 órán keresztül keverés közben 10—15°C hőmérsékleten tartjuk, a kivált csapadékot szűrjük és csökkentett nyomáson 40°C hőmérsékleten 4 órán keresztül szárítjuk. A kapott tilozin-bázis tömege: 4600 g (95%r os kitermelés). 5. példa Az. 1. példában leírtak szerint eljárva 490 kg fermentlevet kezelünk és az adszorbciót 100 liter térfogatú Kastel(R) S 112 gyantán hajtjuk végre. A gyanta ionmentes vízzel történő mosása után a tilozin-bázist 300 liter térfogatú aceton:víz 2,3:1 térfogat arányú elegyével 8 /v/ Óra átfolyási sebességgel eluáljuk. A terméket tartalmazó eluátum 100 liter térfogatú mennyiségét összegyűjtjük, 12%-os foszforsav-oldattal kezeljük, és a pH-értéket 5,5-re állítjuk, majd a térfogatot csökkentett nyomáson 10 literre bepárolva 5000 g tilozin-foszfátot tartalmazó koncentrátumot kapunk. Olvadáspont: 118—125°C. SZABADALMI IGÉNYPONT Eljárás tilozin tisztítására a szervetlen és szerves szennyezők eltávolítására, valamint tilozin tartarátjának és foszfátjának előállítására, azzal jellemezve, hogy egy tilozintartalmú fermentlét szűrünk, és a kapott oldat pH-ját lúggal 7,5-10,0 értékre állítjuk be, és a beállított pH-jú oldatból a tilozint nem ionos polimergyantán adszorbeáltatjuk, és a nem ionos polimergyantáról az adszorbeált tilozint víz/alkohol vagy víz/aceton oldószerrendszerrel eluáljuk, és a kapott eluátumot makroretikuláris gyenge anionos gyantán átengedjük, és a kapott szűrletet besűrítjük, és a száriét pH-ját gyengén lúgosra állítjuk, és a tilozint az oldatból kicsapjuk, és a tisztított tilozint ismert módon elkülönítjük, és/vagy 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
