194816. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-(2-hidroxiaril)-alkán-1-on-oxim és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
194816 2. Táblázat (folyt.) 19 IdŐ /óra/ Gátlás /%/ 3 34 4 31 5 29 +: P 0,05 esetén szignifikáns 20. példa A találmány szerinti vegyületek gátló hatása nyúl-retikulocitákból származó lipoxigenáz enzim aktivitására A nyúl-retikulocitákból eredő lipoxigenázt irodalomban leírt eljárás szerint elektroforetikus és immunológiai szempontból tiszta formában állítottuk elő [S. M. Rapoport és munkatársai: Eur. J. Biochem. 96, 545 (1979)] A lipoxigenáz aktivitását 25°C hőmérsékleten határoztuk meg úgy, hogy az 02-fogyást Clarck-elektród segítségével amperometríásan mérték a következő rendszerben: 0,1 mól kálium-foszfát (pH 7,4), 0,2% nátrium-kolát és 0,53 mmól Iinolsav. A mérőrendszerben az enzim koncentrációja 25 nanomól volt. A vizsgálati anyagokat vákuumban frissen desztillált metil-glikolban oldot- 5 tűk, és a mérés hőmérsékletén az enzimmel nátrium-kólát és Iinolsav nélkül 10 percig előinkubáltuk. A vegyületek hígításait úgy választottuk, hogy a metil-glikol végkoncentrációja az előinkubációs keverékben a 10 2%-ot nem haladta meg; ilyen körülmények között a kontroll-elegyekben említésre méltó gátlás nem alakult ki. Az enzimreakciót nátrium-kólát és Iinolsav hozzáadásával indítottuk meg. A hatóanyag-koncentráció változ- 15 tatásával ábrázoltuk a gátlás titrálási görbéjét, és ebből kiszámítottuk az 50%-os gátláshoz szükséges koncentrációkat, összehasonlítás céljából a vegyületek gátló hatását a kereskedelmi forgalomból beszerezhető, 20 szójababból származó lipoxigenáz-1 enzimen is megvizsgáltuk. Ellentétben a találmány szerinti vegyületekkel, a ketotifen és a dinátrium-kromoglikát — amelyek modern asztma elleni gyógy- 25 szerek — a retikulocitákból eredő lipoxigenáz enzimet még 1 mmól végkoncentrációban sem gátolja. 20 3. Táblázat Találmányunk szerint hatóanyagként alkalmazható vegyületek gátló hatása nyálból eredő retikulociták és szójabab lipoxigenáz enzimére A vegyület Vegkoncentráció mmól Retikulocitából Szójababból 1 f ff szármázó szármázó lipoxigenáz gátló hatasa /%/ /zárójelben a mmólban megadott I50 érték/ 2-Hidroxi-5-metil-laurofenon-oxim 2-Hidroxi-5-klór-1 ,0 100 /0,007/ 67 kaprofenon-oxim 4-Hexil-oxi-2-hidr-1,0 90 / 0,3 / 24 oxi-acetofenon-oxim 4-/Hexadecil-oxi/~-2-hidroxi-aceto-1,0 100 /0,26/ 68 fenon-oxim 0,5 75 / 0, 5 / 38 21. példa A találmány szerinti vegyületek gátló hatása az arachidonsavval vagy trombocita-aktiváló faktorral előidézett trombocita-aggregációra A találmány szerinti vegyületek antitrombotikus és trombolitikus hatását emberből származó autentikus sejtrendszeren in vitro vizsgáltuk. Egészséges véradók véréből trom-12 bocitákban dús plazmát állítottunk elő 1000 x x g sebességű centrifugálással. A trombocigg ták aggregációját aggregométer segítségével, a képződő sejthalmazok diffúz fényszórása, illetve fényelnyelése útján mértük. A trombocitákban dús plazmát a hatóanyagokkal 37°C hőmérsékleten 3 percen át előinkubáltuk, s utána a trombocita-aggregációt vagy0,8mmól 65 arachidonsav, vagy 1 mikromól trombo-
