194565. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 9-(1,3-dihidroxi-2-propoximetil)-guanin gyűrűs foszfát-észtersói és ilyen vegyületeket tartalmazó vírusellenes készítmények előállítására
1 194 565 2 50 ml metanolos ammóniaoldattal. Az oldatot betöményítjük és a visszamaradó fehér, szilárd anyagot metanolból átkristáfyosítjuk. Ilyen módon 582,3 mg 9-(l,3- -dihidroxi-2-propoximetil)-guanint kapunk, op. 250 °C (bomlik). VI. preparátum A. 3,0 g 9-(l,3-dihidroxi-2-propoximetil)-guanin, 2,0 g imidazol, 2,13 g tercier-butil-dimetil-szilil-klorid és 40 ml vízmentes dimctilformamid elcgyét 2 órán át keverjük 0 °C-on, majd vákuumban bcpároljuk. A szirupszerű maradékot vízben felvesszük, ekkor kivált a nyers termék. A szilárd anyagot szűrjük, vízzel, majd toluollal mossuk és vákuumban szárítjuk. B. A szárított nyers mono-lercier-butil-dimetil-szilil-származék (amelyet a fenti A. pont szerint állítjuk elő) 100 ml piridinnel készült, 0 °C hőmérsékletű oldatához hozzáadunk 5 ml benzoilkloridot. Hagytuk, hogy a reakcióelegy szobahőmérsékletre melegedjen (21 °C-ra), és 24 órán át állni hagyjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 300 g szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk, grádiens elűciót végezve 2 liter diklórmetáu és 2 liter, 5 % metanolt tartalmazó diklórmetáu alkalmazásával. 3,5 g nyers, sárgásbarna habot kapunk, amely főként 9-[l-benzoiloxi-3-(tercier-butil-dimetil-szililoxi)-2-propoximeti!]-N2 -benzoil-guaninból áll. C. A fenti B. pont szerint előállított nyers terméket közvetlenül 50 ml 80 %-os ecetsavval kezeljük 80 °C-on 3,5 órán át. Az oldószer lepárlása után a maradékot 500 g szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk, oldószerként 8 % metanolt tartalmazó diklórmetánt alkalmazva. A megfelelő frakciók bepárlásával 611 mg tiszta 9-(l-benzoiloxi-3-hidroxi-2-propoximetil)-N2 - -benzoil-guanin marad vissza hab alakjában. VII. preparátum 8,18 g 9-(l ,3-dihidroxi-2-propoximetil)-guanin, 21,7 g monometoxi-tritil-klorid, 13,3 ml trietilamin, 0,08 g 4-dimetil-amino-piridin és 100 ml dirnetilformamid elegyét 2 órán át keverjük vízmentes körülmények között 40 °C-on, majd metanol hozzáadásával megállítjuk a reakciót, és az elegyet vákuumban bepároljuk. A nyers terméket 500 ml etilacetátban oldjuk, az oldatot 500 ml és 300 ml vizes nátriumhidrogénkarbonáttal, majd 300 ml vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk, végül vákuumban bepároljuk. A nyers terméket 800 ml ctanolban hevítjük, lehűtjük és szűrjük. A szürletet vákuumban bepároljuk, és a maradékot 500 g szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk, az elúciót metanol és diklórmetán 1:4 térfogatarányú elegyével végezve. A terméket etanolból kristályosítjuk. Ilyen módon 11,2 g N2 -monometoxi-tritil-9-(l-monomctoxi-tritiloxi-3-hidroxi-2-propoximetil)-guanint kapunk, op. 159-160 °C. VIII. preparátum 463 mg 9-(l -benzoiloxi-3-hidroxi-2-propoximetil)-N2 - -benzoil-guanin (amelyet a Ví. preparátum szerint állítunk elő) 10 ml etilacetáttal készített, 0 °C-ra hűtött szuszpenziójához keverés közben hozzáadunk 0,75 ml pirofoszforil-kloridot. 2 óra elteltével a reakciót megállítjuk jég hozzáadásával, majd szilárd nátriumhidrogénkarbonáttal pH = 5 értéket állítjuk be. Ennek hatására a foszforilezett termék olajos anyagként kiválik az oldatból. A felülúszó folyadékot dekantáljuk, a maradékot pedig vízben oldjuk és 10 térfogat% butanolt tartalmazó diklórmetánnal extraháljuk. A vizes fázist vákuumban bepárolva közel tiszta, teljes védett foszforilezett termék marad vissza. Ezt a terméket 10 ml tömény ammóniumhidroxiddal kezeljük 16 órán át 40 °C-on. Az oldatot vákuumban bepároljuk, a visszamaradó nedves szilárd anyagot vízben oldjuk és 10 térfogal% butanolt tartalmazó diklórmetánnal extraháljuk. A vizes fázist ezután 2,54 cm átmérőjű és 76 cm magasságú, Sephadex G-10 gyantával töltött oszlopra visszük fel, és az oszlopot vízzel eluáljuk. A tiszta terméket tartalmazó frakciókat elegyítjük, bepároljuk és liofilizáljuk. Ilyen módon 276 mg 9-(l ,3-dihidroxi-2-propoximetii)-guanin-l-(monofoszfát)-észter-nátrium-ammóniumsót kapunk amorf anyag alakjában, op. 215-220 °C. 1. példa 180 mg 9-(l ,3-dihidroxi-2-propoximctil)-guauin-l-(nionofoszfát)-észter-dinátríumsót a szabad savvá alakítunk Dowex 50-X8 kationcserélő gyantával töltött 10 ml tél fogatú oszlopon történő átvezetéssel, eluálószerként vizet használva. A víz bepárlása után 170 mg szabad sav marad vissza színtelen üveg alakjában. Ezt a maradékot 10 ml piridin és 5 ml víz elegyében oldjuk, amely 138 mg 4-morfolino-N,N!-diciklohexil-karboxamidint tartalmazott, majd az oldatot vákuumban bepároljuk. A maradékot 10 ml piridin hozzáadása után ismét bepároljuk, s a piridin hozzáadását és a bepárlást még kétszer elvégezzük. A képződött hab 60 ml piridinnel készült oldatát 45 perc alatt hozzácscpcglctjük 194 mg diciklohexil-karbodiimid 50 ml piridinnel készült, visszafolyató hűtő alatt forralt oldatához. Az adagolás befejeződése után a reakciólegyet további 2,75 órán át forraljuk, majd vákuumban bepároljuk. A visszamaradó fehér, szilárd anyagot 30 ml vízben oldjuk, az oldatot háromszor extraháljuk azonos térfogatú éterrel, majd vákuumban 1 ml körüli térfogatra pároljuk be. A betöményített oldatot preparatív nagynyomású folyadékkromatográfiával tisztítjuk, több befecskendezést alkalmazva. Az 1 cm átmérőjű és 25 cm magasságú oszlop Partisii SAX-10 gyantát tartalmaz. Az oszlopot 20 percig eluáljuk káliumdihidrogénfoszfát pufferoldattal (pH = 6,8), amelynek a koncentrációját 0,02 M érlékről 0,08 M ér'ékre változtatjuk. A tiszta gyűrűs foszfátot tartalmazó frakciókat egyesítjük és bepároljuk. A kapott 535 mg szilárd anyagot Sephadex G-10 gyantával töltött, 5 cm átmérőjű és 60 cm magasságú oszlopon történő átvezetéssel sólalanítjuk, eluálószerként vizet használva. A tiszta sótalanított terméket vízből liofilizáljuk. 82 mg 9-(l ,3-diliidroxi-2-propoximetil)-guanin-gyűrűs foszfátésztert kapunk a monokáliumsó alakjában, op. 250 °C körül (bomlik). 2. példa A. 1,70 g N2-mono-(4-metoxi)-tritil-()-[ |-mono-(4-metoxi)-tritiloxi - 3 -hidroxi-2-propoximetilJ-guanin, 2,68 g diciklohexil-karbodiimid, 0,13 M ciano-etil-foszfát és 50 ml piridin elegyét 2,5 napig keverjük 21 °C-on, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
