194478. lajstromszámú szabadalom • Szerves foszforszármazékok sóit hatóanyagként tartalmazó gomba- és/vagy baktériumölőszerek és eljárás a hatóanyagok előállítására
1 194 478 2 6. példa ln vivo kísérlet árpán, Erysiphe graminis (árpaüszög) ellen 5 A vizsgálandó hatóanyag alábbi összetételű vizes emulzióját készítettük el finom őrléssel: vizsgálandó hatóanyag 40 mg Tween 80 etilénoxid-szorbit polikondenzátum-oleát felületaktív anyag) 0,4 ml 1 o víz 40 ml Ezt a vizes emulziót vízzel hígítva a kívánt koncentrációt kapjuk. Tőzeg és puzzolánföld keverékébe vetett, cserepekben nevelt árpanövényeket 10 cm magas állapotukban az alábbi koncentrációjú vizes emulzióval bepermeteztük. A kísérletet kétszer megismételtük. 48 óra múlva az árpanövényeket Erysiphe graminis spórákkal bepermeteztük, a permetezéssel a hasz- ^ nált növényeket megfertőzve. Az eredményeket 10 nappal a fertőzés után állapítottuk meg. Azt találtuk, hogy fenti körülmények között „5 1 g/liter dózissal a 2. számú vegyület teljes védelmet és a 6., 9. és 12. számú vegyület jó védelmet biztosított. 7. példa 20 8. példa ln vivo kísérlet Puccinia recondita ellen, ami a gabonaüszög okozója Körülbelül 10 cm magasságot elért, üvegházban nevelt búzanövényeket (Talent fajta) a találmány szerinti vegyületek különböző koncentrációit tartalmazó, a 4. példa szerint készített vizes emulziókkal permetezve kezeltünk. 48 óra múlva a kezelt növényeket már fertőzött növényekből készített Puccinia recondita vizes spóraszuszpenziójával megfertőztük, amely milliliterenként körülbelül 80 000 spórát tartalmazott. A búzanövényeket 48 órára körülbelül 20 °C hőmérsékletű és 100 % relatív nedvességtartalmú kamrába helyeztük. Ezután a relatív nedvességtartalmat 60 %-ra csökkentettük. A növények állapotát fertőzést követő 15. napon ellenőriztük, és a százalékos védelmet az említett módon meghatároztuk. Azt találtuk, hogy a fenti körülmények között ï g/liter dózissal a 13., 14. és 30. számú vegyületek teljes védelmet biztosítottak és a 15., 17., 23., 31. és 34. számú vegyületek jó védelmet nyújtottak ; 0,3 g/liter dózissal a 16., 24., 26., 28. és 30. számú vegyületek jó védelmet nyújtottak; és 0,1 g/liter dózissal a 18., 19., 20. és 27. számú vegyületek teljes védelmet adtak. In vitro kísérlet Pythium de Baryanum ellen, ami kiszáradást okoz és Botrytis cinerea ellen, ami a szürke penész okozója 35 A vizsgálandó vegyületet 1 %-os acetonos oldat alakjában, olvadáspontja (70 °C) feletti hőmérsékleten a steril táptalajt tartalmazó kémcsőbe töltöttük. összekeverés után a vegyületet tartalmazó táptalajt aszeptikus körülmények között 10 cm-es Petri- 40 csészébe vittük át. Ily módon a hatóanyag különböző dózisait tartalmazó csészesorozatot készítettünk elő. 24 óra múlva a csészéket beoltottuk, úgy, hogy a közepükbe a vizsgált gomba (Pythium) micéliumát implantáltuk (9 mm átmérőjű) vagy egy csepp koni- 45 dium-szuszpenziót (Botrytis) cseppentettünk. Ezután összehasonlítást végeztünk, hogy milyen sebességgel szaporodik a gomba a vegyületet nem tartalmazó táptalajon (kontroll) és az előzetesen előírt dózisokat tartalmazó táptalajon. A gomba szapo- 50 rodásának sebességét a kolónia átmérőjének mérésével határoztuk meg. Fenti körülmények között azt találtuk, hogy 0,1 g/liter dózissal a.4. számú vegyület teljesen gátolta a Pythium szaporodását, míg a 2., 3., 9., 12., 55 13., 14., 15., 16., 18., 19., 20., 21., 23., 24., 25., 26., 27., 28., 29. és 30. számú vegyületek jó gátló hatást fejtettek ki. Ugyanezzel a dózissal a 3. és 6. számú vegyületek jó védelmet nyújtottak a Botrytis cinerea ellen. 60 65 ln vitro kísérletek baktériumok ellen 20 ml agar-táptalajt forrón 9 cm átmérőjű Petricsészékbe töltöttünk és a táptalajt hagytuk kihűlni. A vizsgálandó vegyületnek a kísérleti körülmények között a baktériumok szaporodására iners, szerves vagy szervetlen oldószerrel készített 1 %-os oldatát injektáltuk kalibrált pipettával minden Petricsészébe 24 óra múlva a Petri-csészék tartalmát beoltottuk a választott baktériummal és a kísérlet eredményét 22 °C ± 2 8C hőmérsékletű térben megfigyeltük. 3 nappal a beoltás után ellenőriztük a tenyészeteket, vizuálisan összehasonlítva az inhibitort (vizsgálandó vegyületet) nem tartalmazó kontroll és a vegyületet tartalmazó baktérium-kolónia növekedé$ét. Fenti körülmények között azt találtuk, hogy Erwinia amylovora (INRA:CNEP 1430) esetében a 11., 12., 15., 16., 19., 22., 23., 24. és 27. számú vegyületek 30 mg/liter dózissal, és a 13., 14. és 21. számú vegyületek 10 mg/liter dózissal teljesen gátolták a baktérium szaporodását; Xanthomonas oryzae (INRA:CNBP 1951) esetében a 27. számú vegyület 30 mg/liter dózissal, a 22. számú vegyület 10 mg/liter dózissal, a 13., 14., 16., 17., 18., 21., 24., 25., 26. és 28. számú vegyületek 3 mg/liter dózissal, és a 11., 12., 15., 19. és 23. számú vegyületek 1 mg/liter dózissal teljesen gátolták a baktérium szaporodását; és Corynebacterium michiganense (1NRA:CNBP 2108) esetében a 11., 12., 19. és 27. számú vegyület 5
