194317. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A40926 antibiotikum komplex és tiszta komponensei, a PA,PB,A,B,BO faktor, valamint ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 194 317 2 B) Az 5. ábrán bemutatott IR adszorpciós spektrum a következd abszorpciós maximumokat mutatja (cm'1): 3700-3080, 3080-2700 (nujol), 1720-1625, 1625-1560, 15005, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1295, 1230, 1210, 1150, 1100-1040, 1030, 1015, 970, 890, 840, 810, 720 (nujol). C) A 6. ábrán bemutatott 1H NMR spektrum a következő jel-csoportokat mutatja (ppm) 270 MHznél, az 'H NMR spektrumot DMSO-d6-ban (hexadeuterodime tilszulfoxid) vettük fel, belső standardként (0,00 ppm) TMS-t használva, delta (ppm), 0,85, (d, izopropil-metilek), 1,15 ) (b. 13H), 1,44 (kb. 2H), 2,02 (2H), 2,32-2,35 (3H), 4-6,1 (kb. 16H), 6,1-8 (kb. 23H), 8,52, 9,30, 9,68 (széles sávok, mozgékony protonok)* 2,5-4 : interferencia a HjO csúcsok miatt). D) Retenciós idő (Rt): 1,22 és 1,27 - a teikoplanin A2 2. komponenséhez képest (R^ = 20,3 perc) — fordított fázisú HPLC módszerrel a következő körülmények között végzett elemzés során: oszlop: Ultrasphere ODS (5 jum) Altex (Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) + 250 mm, elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm), Az eluálószer: CH3CN 10% pH 6,0-ra (2,5 g/1) NaH2P04 . HjO 90% beállítva B-eluálószer: CH3CN 70% pH 6,0-ra (2,5 g/1) NaH2P04 . HjO 30% beállítva eluálás: lineárisan grádiens 5%-60% között (B eluálószer az A elzálószerben), 40 perc alatt, áramlási sebesség: 1,8 ml/perc, UV detektor: 254 mm belső standard: teikoplanin Aj 2. komponens (Gruppe Lepetit S. p. A.) E) Az elem-analízis - a minta előzetes, kb. 140°C-on közömbös atmoszférában közelítő (átlagos) százalékos összetételt mutatja: szén 54,09, hidrogén 5,13, nitrofén 6,34, klór) összes (4,12, klór (ionos) 0,39%. Szervetlen maradék 900°C-on levegőn végzett szárítás során : 5%. F) Sav-bázis titrálás titrálási görbe 2-metoxi-etanol (MCS): víz 4 : 1 arányú elegyében: a HC1 felesleg hozzáadása után (pH 2,7) KOH-dal végzett titrálás 4 izonizálható funkció jelenlétére mutat, amelyek pkj^Qg értékei a következők: 4,5, 5,6, 7,2, 9,2. G) Az Rf érték 0,21 és a teikoplanin Aj 2. komponenshez viszonyított Rr érték 0,53 a következő kromatográfiás rendszerben: 5%-os (tömeg/térf.) vizes Na2 S04 70, acetonitril 30, szilanizált szilikagél ) 60 F254 Mere — lemezek (rétegvastagság 0,25 mm). Kimutatás:-UV fény,- Pauly reagenssel - diazotált szulfanilsav (J. Chromatog. 20, 171, 1965 és Z. Physiol. Chem. 292, 99,1953) — sárga szín,- bioautográfia Bac. subtills ATCC 6633 felhasználásával, Davis-f. minimális táptalajon. H) Molekulatömeg kb. 1730 a FAB-MS spektrum alapján, amely a M ♦ H csúcsot 1731-nél mutatja. Az A 40926 antibiotikum Bn faktor fizikokémiai jellemzői A) A 4. ábrán bemutatott UV abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja: a) 0,1N HC1 28z b) pH 7,38 foszfát puffer 281 300 (váll.) c) 0,1N nátrium- vagy káliumhidroxid 300 d) pH 9,0 foszfát puffer 283 e) metanol 282 B) Az 5. ábrán bemutatott IR abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm’1 ): 3700-3080, 3080-2700 (nujol), 1720-1625, 1625-1560, 1505, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1295, 1230, 1210, 1150, 1100-1040, 1030, 1015, 970, 890, 840, 810, 720 (nujol). C) A 6. ábrán szemléltetett 1H-NMR spektrum a következő jel-csoportokat (ppm) mutatja a 270 MHz tartományban (az 1H NMR spektrumot DMSO-d6-ban (dimetilszulfoxid, hexadeutere) vettük fel, belső standardként TMS-t — 0,00 ppm - használva): delta, ppm: 0,85 (d, izopropil-metilek) 1,15 (kb. 13H), 1,44 (kb. 2H), 2,02 (2H), 232-2,35 (3H), 4-6,1 (kb. 16H), 6,1 - 8 (kb. 23H), 8,52, 9,30, 9,68 (széles sávok, mozgékony protonok), 2,5-4 : interferencia a HjO csúcsok miatt. D) Retenciós idő (Rj) 1,22 a teikoplanin Aj 2. komponenshez viszonyítva (R. = 20,3 perc) fordított fázisú HPLC technikával a Következő körülmények között végzett elemzés során: oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm) Altex (Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm, elő-oszlop : Brownlee Labs RP (5 £im) Az eluálószer: CH3CN 10% pH 6-ra (2,5 g/1) NaH2P04 . Hj) 90% beállítva, B eluálószer : CH3CN 70% pH 6,0-ra (2,5 g/1) NaH2P04 . H2) 30% beállítva eluálás: lineáris grádiens, 5%—60% között (B eluálószer A eluálószerben), 40 perc alatt áramlási sebesség: 1,8 ml/perc, UV detektor: 254 nm, belső standard: teikoplanin Aj 2. komponens (Gruppé Lepetit S. p. A.) E) Az elem-analízis - miután a mintát előzetesen kb. I40°C-on közömbös atmoszférában szárítottuk . ítömegveszteség 9,6%) — a következő közelítő (átlagos) százalékos összetételt mutatja: szén 54,09%, hidrogén 5,13%, nitrogén 6,34%, klór (összes) 4,12%, klór (ionos) 0,39%. Szervetlen maradék 900°C-on levegőn végzett izzltásután:5%.___= F) À sav-bázis titráiási görbe 4 : 1 arányú 2-metoxi-etanol (MCS) — víz elegyben - HC1 felesleg hozzáadása után KOH-dal végzett titrálással - 4 ionizálható funkció jelenlétére mutat, amelyek pkMrc értékei a következők: 4,5, 5,6,7,2, 9,2. G) Az Rf érték 0,21 és a teikoplanin Aa 2. komponenshez viszonyított Rj- érték 0,53 a következő kromatográfiás rendszerben: 5%-os (tömeg/térf.) Na2S04 70, acetonitril 30, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 8
