194317. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A40926 antibiotikum komplex és tiszta komponensei, a PA,PB,A,B,BO faktor, valamint ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 tású parenterális adagolási forma. A nyújtott hatástartamú készítményeket különböző mechanizmusok és módszerek alapján állíthatjuk elő, mint ez a szakember számára ismert. Az A 40926 antibiotikum komplexet, ennek A, B, Bq, PA vagy PB faktorát tartalmazó nyújtott hatású Készítmény az antibiotikumot vízben oldhatatlan alakban tartalmazza, vizes vagy olajos közegben. Ezek az alakok (azaz az oldhatatlan só vagy a szabad sav) ténylegesen nagyon lassan szabadulnak fel intramuszkuláris bevitel során, alacsony vízoldhatóságuk miatt. így tartós vérszíntek érhetők el az antibiotikumokból. Gyógyszerkészítmények előállítása: Intramuszkuláris injekció alakjában bevihető egység-adagolási készítményt állítunk elő oly módon, hogy 1000 mg A 40926 antibiotikum A faktort 5 ml 8%-os propilénglikolos steril oldatban (USP) szuszpendálunk. Intramuszkuláris injekció alakjában bevihető egység-adagolási készítményt állítunk elő oly módon, hogy 500 mg A 40926 antibiotikum B faktort 5 ml steril, 8%-os propilénglikolos oldatban (USP) szuszpendálunk. Intramuszkuláris injekció alakjában bevihető egység-adagolási készítményt állítunk elő oly módon, hogy 2000 mg A 40926 antibiotikum B faktor nátriumsót 5 ml steril injekciós vízben szuszpendálunk. A találmány szerinti antibiotikumok ezenkívül hasznosak a Clostridium difficile növekedésének elnyomásában, amely a bélben pszeudomembrán kolitiszt okoz. Az antibiotikum oly módon használható fel a pszeudomembrán kolitisz kezelésében, hogy az antibiotikumból vagy egy gyógyászati szempontból elfogadható sójából orális bevitelre gyógyászati szempontból elfogadható, hatásos dózist tartalmazó adagolási formát állítunk elő. Ilyen felhasználás céljából az antibiotikum zselatin kapszulákban vagy folyékony szuszpenzióban vihető be. Gyógyszerként való alkalmasságukon kívül a találmány szerinti vegyületek állati növekedést gyorsító anyagokként is felhasználhatók. Erre a célra egy vagy több, találmány szerinti ve"gyületet egy megfelelő takarmányban orálisan viszünk be. A pontos koncentrációt annak figyelembe vételével határozzuk meg, hogy annak az aktív anyagot a növekedést gyorsító tényleges mennyiségben kell biztosítania, normális mennyiségű takarmány elfogyasztása esetén. A találmány szerinti aktív vegyületeknek az állati takarmányhoz való hozzáadását előnyösen úgy végezzük, hogy megfelelő takarmány premixet készítünk, amely az aktív vegyületeket hatásos mennyiségben tartalmazza és a premixet bevisszük a teljes takarmányba. Egy másik megoldás szerint egy közti koncentrátumot vagy takarmány adalékot - amely az aktív komponenst tartalmazza - keverhetünk a takarmányba. Az ilyen takarmány premixek és teljes takarmányok előállítási és adagolási módjával kapcsolatban kézikönyvekre utalunk (1. pl.: Applied Animal Nutrition, W. H. Freedman Co., San Fracisco, USA, 1969 vagy Livestock Feeds and Feeding, 0 and B books, Corvallis, Oregon, USA, 1977) A következő példák részletesebben megvilágítják 12 2 a találmányt. A termékek fizikai-kémiai állandói megegyeznek a fentiekben megadottakkal. 1. példa Fermentáció az Actinomadura sp. ATCC 39727 törzzsel Az A 40926 antibiotikumot termelő törzs f Actinomadura sp. ATCC 39727) zabliszt agaron (ferde agar, kémcsőben (2-3 héten át 28°C-on tenyésztett kultúráját használjuk fel egy 500 ml-es Erlenmeyer lombik beoltására, amely 100 ml következő összetételű táptalajt tartalmaz: 0,5% húskivonat 0,5% élesztő-autolizátum 0,5% pepton 0,3% kazein-hidrolizátum 2% glükóz 0,15% NaCl (pH sterilezés előtt 7,5). A lombikot 28°C-on forgó rázógépen (200 ford./ perc) kb. 72 órán át inkubáljuk, majd a tenyészetet fermentorba visszük át, amely az előbbi táptalajból 4 litert tartalmaz. Ezt a kultúrát 28°C-on kb. 72 órán át tenyésztjük kb. 2 liter/perc levegő-bevezetéssel és kb. 900 ford./perc kevertetési sebességgel. Ezután a tenyészetetet ugyanilyen táptalaj beoltására használjuk fel, 200 literes fermentorban. A fermentort 100 liter/perc steril levegő bevezetésével levegőztetjük és 250 ford./perc sebességgel kevertetjük, kb. 28 C-on. Az antibiotikum-termelést a papírkorongos agardiffúziós módszerrel követjük, teszt-organizmusként Bac. subtilist használva, minimális táptalajon. A maximális aktivitást 72—96 óra után éljük el. 2. példa Az A 40926 antibiotikum kinyerése A) A fermentlevet 4°C-ra hűtjük le, pH-ját 9,5-re állítjuk be és kevertetjük. Kb. I óra elteltével szűrjük és a szürlet pH-ját vizes ásványi savval kb. 3,5-re állítjuk be. Az elegyet 4°C-on 30 percen át keverttíjük, majd szűrési segédanyaggal (Hyfio-Flo-Ma^j szűrjük. A tiszta szürletet elvetjük és a szűrőlepényt ionmentesített vízben szuszpendáljuk, a szuszpenzió pH-ját kb. 8,5-re állítjuk be, kevertetjük, majd szűrjük. A kinyert szűrőlepényt ugyanennek az eljárásnak, vetjük alá. Az egyesített szürletek az A 40926 antibiotikumot tartalmazzák. B) Az 1. példa szerint kapott fermentléhez (szűrés és a tiszta szürlet pH-jának kb. 8,5-re való beállítása után), vagy a 2.A) példa szerint kapott egyesített szürlethez 2 liter duzzasztott módosított mátrixot (D-ala-D-ala-epszilon-aminokaproil-Sepharose) adunk. Egy éjjelen át szobahőmérsékleten való kevertetés után a gyantát szűréssel kinyerjük és egymás után kb. 2x10 liter pH 7,5 0,45 mM HCl-trisz-pufferrel) trisz = 2-amino-2-hidroximetil-l ,3-propándio! (amely 5%/tömeg/térf.) NaCl-t tartalmaz, majd 4x20 liter desztillált vízzel mossuk. Az A 40926 antibiotikumot 2x20 liter 1%-os (tömeg/térf.) ammóniumhidroxiddal eluáljuk a gyantáról. Az eluátumokat egy éjjelen át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd kis térfogatra (kb. 2,45 liter) töményítjük be. A vizet n-butanollal végzett azeotróp desztillációval távolítjuk el. A maradékhoz petrolétert adunk és így 2,4 g nyers A 40926 antibiotikumot csapunk ki. 194317 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
