194314. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-glükozidáz gátló új pszeudooligoszacharidok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 194 314 A találmány tárgy eljárás új, biológiailag aktív pszeudo-oligoszacharidok, valamint fiziológiailag elviselhető sóik előállítására. Az új vegyületek az a-glózidáz-enzimeket, így például az a-amilázt és a diszacharázt gátolják, ezért a humán és állatgyógyászatban, az állati takarmányozás területén, valamint a keményítő biotechnológiai alkalmazásban használhatók.. Az új pszeudoollgoszacharidok az (1) általános képletnek felelnek meg, amelyben p jelentése 1 vagy 2 m jelentése 1,2 vagy 3 és n jelentése 1 és 6 közötti egész szám. A vegyÖleteknek redukáló jellege, valamint bázikus kémhatása van. Előnyösek az olyan (I) általános képletű pszeudoolgiszachaiidok, amelyekben p = 1, m = 1 vagy 2 és n = 1, 2, 3 vagy 4. Különösen a2 olyan (I) általános képletű vegyületeket részesítjük előnyben, amelyekben F U -, n = 1 :<J«4H74Nau3a, mólsuly = 1142 (W46 A), P M TM3(Mé(W462Bx’é0"84Ní°37’ P M=mi4626é(W46 C)5éH94Ní°42’ Az (I) általános képletű vegyületeket az alábbiakban W46, illetve W46 A, B és C jelű inhibitornak is nevezzük. A vegyületeket vagy elegy ként, vagy külön-külön elválasztott vegyidéiként izoláljuk. A találmány a fenti pszeudooligjszachaiidok, előnyösen a W-46 A, B és C jelű inhibitorok, valamint az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására vonatkozik. A találmány szerinti eljárás abban áll, hogy az (1) általános képletű pszeudooligoszacharidokat termelő Streptomyces törzseket sülylyesztett kultúrában, tápközegben tenyésztünk, az inhibitorokat a micéliumból vagy a tenyészléből önmagában ismert módon kinyerjük, tisztítjuk és kívánt esetben savaddidós sóvá alakítjuk. Különösen alkalmas a Streptomyces galbus subsp. FH 1716 jelű törzs, amely a Német Mikroorganizmustörzs gyűjteményben (DMS) 3007 szám alatt van letétben. A W46 jelű inhibitorok előállításához azonban a nevezett törzs variánsait és mutánsait is alkalmazhatjuk. A Streptomyces galbus subsp. FH 1716 jelű, DSM 3007 szám alatt letétbe helyezett törzs taxonómiai tulajdonságai a Streptomyces galbus leírásának (Bergey s Manual of Determinative Bacterology, 8. kiadás, Verlag Williams u. Wilkins Corp. Baltimore 1974) megfelelnek. Különbség a leírt törzsekhez képest néhány fiziológiai jellemzőben van. összehasonlító és referenda törzsként a Streptomyces galbus DSM 40480 törzset választottuk, a két törzs jellemzőit az alábbi 1. táblázatban közöljük: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 1. táblázat Str. galbus Str. galbus FH 1716 DMS 40480 arabinóz ♦ (+) xilóz « ♦ ramnóz raffinóz _ (♦) mannóz * ♦ inozit _ ♦ keményítő _ (+) p-hidroxibenzoesav (+) ♦ oxalát (♦) _ malonát (♦) laktát _ (+) glükonát — ... fii— + = jó hasznosítás - = nincs hasznosítás (V) = hasznosítás kérdéses. ____________________ A fenti táblázat jobb oszlopában megadott tulaj - donságú Streptomyces galbus törzset az irodalom mjndezideig nem írta le, a DMS 3007 sz. alatt letétbe helyezett Streptomyces galbus FH 1716 törzs tehát új. A W46 inhibitorok előállítása során az alábbiak szerint járunk el. A Streptomyces galbus FH 1716 törzset vizes tápközegben süllyesztett és előnyösen aerob tenyészetben addig tenyésztjük, míg a W46 jelű inhibitorok elegendő koncentrádóban keletkeztek. A tápközeg egyrészt szénforrást, így például szénhidrátokat, másrészt nitrogénfonást, így protein-tartalmú anyagokat tartalmaz. Előnyös szénforrások például az alábbiak: glükóz, szacharóz, glicerin, malátakivonat, keményítő, olajok, zsírok, stb. Nitrogénforrásként a következőket részesítjük előnyben: kukoricalekvár, élesztőkivonat, szójaliszt, halliszt, sovány tejpor, félig emésztett kazein és húskivonat. Lehetséges az ún. „szintetikus tápoldatok alkalmazása is. Előnyös lehet, ha a tápközeghez nyomelemeket, így cinket, magnéziumot, vasat, kobaltot vagy mangánt adunk. A W46 jelű inhibitort eredményező fermentálást széles hőmérséklettartományon belül valósíthatjuk meg. Fermentálhatunk például 10-49°C-on, előnyösen mintegy 20—35°C-on. A tápközeg pH-értékét olyan értéken tartjuk, amely a mikroorganizmus növekedése szempontjából kedvező, például 4,0 és 10,0 közötti érték, előnyösen 6,0 és 9,0 közötti érték. A tápközeg minőségi és mennyiségi összetételétől, a tenyésztés körülményeitől, így a levegőztetés mértékétől, a hőmérséklettől és a pH-értéktől függően a W46 jelű inhibitor mintegy 1-10 nap alatt keletkezik a tápközegben. A W46 jelű inhibitorok mind a mlcéllumban, mind a tenyészlében jelen vannak, a főtömeg általában a szürletben van. Ezért előnyösen a vizes fázist például szűréssel vagy • centrifugálással elválasztjuk a micéliumtól, és a kívánt termést ismert módon izoláljuk és tisztítjuk. Erre számos eljárás alkalmas, így például ioncserélős kromatográfia, molekulaszűrő, adszorbeáló gyanták, oldószerekkel vagy sókkal végzett kicsapás, ultraszűrés, Craig-elosztás, stb. A W46 A. B és C jelű inhibitorok kinyerésére 2
