194312. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új policiklusos éter antibiotikumok és ezeket tartalmazó készítmények előállítására
1 194 312 2 NZ amin YTT 5 kalcium-karbonát 3 A fcrmentor hőmérsékletét 28°C-on tartjuk, levegőztetést és 1700 ford/perc keverést alkalmazunk. 296 óra múlva a teljes fcrmentlevet 1080 1, majd 720 1 térfogatú metfl i/.obutil ketonnal extraliáljuk. Az extraktumot elválasztjuk, és vákuumban 10 1 barna, olajos anyaggá töményítjük. Az így kapott anyagot 5 percig metanollal elkeverjük. A metanolos fázist elválasztjuk és az olajos anyafot további 6 1 metanollal keverjük. A metanolos rakciókat egyesítjük és vákuumban bepároljuk (4 1). 1 liter metanolos extraktumot 2 liter hexánnal elegyítünk és Lapp szőlőben készíteti 3 kg szilika-S;élt tartalmazó oszlopra óntjük. A szilikagcl oszopot egymást követően 11 liter hexánnal, 7,5 liter kloroformmal és végül 7,5 liter eillacctállal mossuk. A frakciókat vékony ró legkromatográtla segítségevei analizáljuk. A terméket a kloroformos és az etilaeetátos frakciók tartalmazzák. A kloroformos és ctilacetátos frakciókat 4 pH értékű, fősz.torsával tartalmazó vízzel, majd 5%-os dinátrium foszfát pufferrel (amelynek pHját 1 n nátriumliidroxjd segítségével 9,5 értékre állítjuk be) mossuk. Ezután a szerves frakciókat nátriuinszulfátom mcgszáríljuk és vákuumban bepároljuk. Az. olajos maradékot kis menynylségű hexánnal eldolgozzuk, miközben kristályosodás történik. A kristályos anyagot leszűrjük. A fenti további 3 liter metanolos koncentrátumot ugyanilyen módon feldolgozzuk és a négy részletben kapott kristályos anyagot egyesítjük. 300 g UK-58,852 antibiotikum nátrium sót kapunk. 4. példa A CP-70,228 antibiotikum izolálása a fermentációs anyalúgból Az UK-58,852 antibiotikum kristályosításakor kapott anyalúg 25 g-ját 50 mm x 1 mm-es szllikagél, kloroform aceton (4:1) oldószercleggyel nedvesített és eluált oszlopon oszlopkromatografáljuk. Az oszlopot 10 ml/perc sebességű oldószerelcgy átfolyás mellett fejlesztjük ki, és 10 ml-es frakciókat szedünk. A frakciókat vékonyrétegkromatográOa segítségével analizáljuk. A 95-230 frakciók tartalmazzák az UK-58,852 antibiotikumot. A 300. frakció után a rendszerhez 25% metanolt adunk és további két liter duciméi folytatjuk a kromaiográfiát. A CP-70,228 antibiotikum ezekben a frakciókban ta lálható, amelyeket bepárolunk, és 4,5 g sárga olajat kapunk. Ezt az anyagot 25 mm x 50 cm-es Sephadex LH 20, metanollal nedvesített oszlopon 1 ml/perc oldószer átfolyási sebességgel kromatografáljuk. Minden 5 percben frakciót váltunk és a frakciókat vékonyrétegkromatográfla segítségével analizáljuk. A CP-70,228 antibiotikumot tartalmazó frakciókat bepároljuk és 1 3 g sárga olajat kapunk. Ezt 25 mm x 50 cm-es, 2,5% metanoltartaimú kloroformmal nedvesített szllikagél oszlopon kromatografáljuk. 5 ml/perc átfolyási sebességet alkalmazunk és 2 percenként váltunk frakciót. A vékonyrétegkromatográfiás analízis szerint CP-70,228 antibiotikumot tartalmazó frak dókat bepároljuk és 100 mg szilárd, fehér CP-70,228 antibiotikumot kapunk. O.p.: 113 - 123°C. Elemanalízis a CjjHjoOm képlet alapján: számított: C 62,70, H 8,94, mért: C 62,63, H 8,82. UV: nincs adszorpció. Optikai forgatás: (a)^ = 21,8°C (c * 0,5, metanol). ÍR (KBr) cm'} : 3439, 2970, 2933, 2877, 1716, 1636, 1457, 1380, 1318, 1293, 1240, 1218, 1165, 1117, 1097, 1069, 1032, 989, 940, 912, 897,859. 5. példa UK-58,852 átalakítása CP-70,228 nátrium-sóvá 11 g szabad sav UK-58,852 antibiotikumot 200 ml metanolban oldunk, és szobahőmérsékleten állni hagyjuk. 1 őrá múlva vékonyrétegkromatográfiás analízis szerint az UK-52,852 antibiotikum teljes mennyisége átalakul CP-70,228 antibiotikummá. A metanolt ezután vákuumban elpárologtatjuk és a maradékot 200 ml kloroformban oldjuk. A kloroformos oldatot 200 ml 5%-os dinátriu in foszfát pufferrel keveijük és pH értékét 6 n nátriumhhlroxid segítségével 10,5 értékre állítjuk be. A fázisokat elválasztjuk és a kloroformos oldatot nátriumszulfáton megszán tjük, majd vákuumban bepároljuk. A kapott olajos anyahoz 200 ml heptánt adunk és az oldatot vákuumban ismét bepároljuk. Eközben a CP-70,228 nátrium-só kikristályosodik. A sót nagyvákuumban 5 óráig 60°C-on szárítjuk. Kromatográfiás és spektroszkópai adatok szerint a termék azonos a fermentációval előállított CP-70,228 anyaggal. O.p.: 150 155°C. Elemanalízis a C53H8yO|g Na képlet alapján: számított: C 61,37, H 8,65, mért: C 60,49, H 8,75. UV: nincs abszorpció. Optikai forgatás: (a).-, = 13,6°C (c = 0,5, metanol). IR (KBr) cm'1: 3429, 2973, 1935, 2878, 1594, 1455, 1399, 1379, 1319, 1291, 1268, 1242, 1215, 1189, 1165, 1117, 1096, 1068, 1030, 990,975,943,891,860,833. 6. példa CP- 70,828 izolálása a fermentációs anyalúgból A kis mennyiségben keletkező CP-70,828 antibiotikumot a fermentációs anyalúgból ismételt oszlopkromatográfla segítségével izoláljuk. A CP-70,828 anyagot a CP-70,228 anyaghoz hasonlóan vanilin reagenssel hívjuk elő. Az egyyfoltos (vékonyrétegkromatográfiás analízis szerint) CP-70,828 anyagot heptánból kristályosítjuk és 20 mg terméket kapunk. O.p.: 133- 136°C. Elemanalízis a C^H^O^ képlet alapján: számított: C63.01, H 9,01, mért: C 62,66, H 8,85. UV: nincs abszorpdó. IR (KBr) cm 1: 3419, 3259 (széles), 2968, 2926, 1871, 1614, 1455, 1377, 1363, 1315, 1260, 1238, 1206, 1175, 1160, 1116, 1092, 1063, 1030,986,970,939, 921,887, 857, 827. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) általános képletű antibiotikumok és gyógyszerészetlieg elfogadható kationos sóik előállítására, ahol az általános képletben R és R1 jelentése egyaránt hidrogénatom, vagy R jelentése hidrogénatom, és R1 jelentése metilesoport, vagy RésR1 jelentése * egyaránt metilesoport, azzal jellemezve, hogy az sp. ATCC 39697 mikroorganizmust vagy annak (I) általános képletű vegyület termelésére alkalmas mutánsát, illetve va5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 9
