194312. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új policiklusos éter antibiotikumok és ezeket tartalmazó készítmények előállítására
1 194 312 2 belül 16 óráig lnkubáltuk. Minden vizsgálatot három párhuzamos mintán végeztük. Az inkubálás után 5 ml mintát 1 ml 25%-os metafoszforsawal elegyítettünk. 10 perc múlva 0,25 ml hangyasavat adtunk az elegyhez és 10 percig 1500 ford/perc sebességgel centrifugáltuk. Ezután a mintákat D. W. KeDog, J. Dairy Science, 52, 1690, 1969, módszerével gáz-folyadékkromatográfia segítségével analizáltuk. Az ecetsavnak, propionsavnak és butánsavnak megfelelő csúcsokat mértük a kezelt és a nem kezelt minták esetében. Amennyiben az UK-58,852 antibiotikumot vizsgáltuk ilyen in vitro eljárással 10 mikrogram/ml koncentrációban, a nem kezelt és UK-58,852 antibiotikumot nem tartalmazó kontroll oldatokhoz képest. körülbelül 93%-os propionsav termelés növekedést okozott. A kereskedelemben kapható salinomycin (egy másik polieiklusos-éter antibiotikum) ezzel szemben 10 mikrogram/ml koncentrációban körülbelül 88%-os propionsav termelés növekedést idéz elő a kontroll oldathoz képest. Hasonló eljárással egy független vizsgálatban kimutattuk, hogy a CP-70,-228 antibiotikum 10 mikrogram/ml koncentrációban körülbelül 30%-os propionsav termelés növekedést idéz elő. Ebben az esetben salinomycint alkalmazva a propionsav termelés növekedés 40%. Ezek az adatok azt mutatják, hogy az UK-58,852 és a CP-70,228 találmány szerinti eljárással előállított antibiotikumok megnövelik a kérődzők, mint például a szarvasmarhák és juhok tápanyag hasznosítási képességét. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek hasonló hatást fejtenek ki az egy-gyomrú állatok, például a sertések és nyulak esetében is. A találmány szerinti eljárással előállítottuk UK-58,852 és CP-70-228 antibiotikumok az állati tápanyagba szabad sav, nátriumsó, káliumsó vagy ezek keveréke formájában keverhetők be. Az UK-58,852 és CP-70,228 antibiotikumok nyers formája vagy az antibiotikumokat tartalmazó megszárított fermentlé száraz maradéka ugyancsak alkalmazható állati tápanyagokban a kívánt hatásos koncentrációnak megfelelő mennyiségben bekeverve. A találmány szerinti eljárásban kisebb mennyiségben keletkező CP-70,228 és CP-70,828 antibiotikumok in vitro baktériumellenes aktMtását a III. táblázatban foglaltuk össze. III. táblázat Baktériumellenes hatás MIC, mikrogram/ml Mikroorganizmus Törzs CP-70,228 CP-70,828 száma nátrium só nátrium só Staphylococcus aureus 01A005 3.12 25 01A052 3.12 25 01 Al 10 3.12 25 01A400 6.25 25 Streptococcus faecalls 02A400 50 >50 Streptococcus pyogenes 020203 0.10 3. Actinomyces pyogenes Actinobacillus pleu 14D011 034 ropneumoniae 54B004 >100 PasteureQa múltoddá 59A006 >100 III, táblázat folytatása Baktériumellenes hatás Mikroorganizmus Törzs CP-70,228 CP-70,828 _________________száma nátrium só nátrium só Clostridium perfrlngens 10A009 1.58 Bacteroides fragilis 78C024 12.5 Fusobacterium necrophorum 84C0Ö4 >100 T reponema hyody-senteriae 94A007 1.58 A Gram-negatív baktériumokkal, mint például Excherischla coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens és Enterobacteraceae aerogenes baktériumokkal szemben, a MIC értékek minden egyes esetben > 50. A CP-70,228 antibiotikum coccidiosis csirke fertőzésekkel szembeni hatékonyságát, amennyiben azt a korábban leírt eljárás szerint alkalmaztuk, a IV. táblázatban foglaltuk össze. IV. táblázat CP-70,228 antibiotikum in vivo coccidiosis ellenes hatása Fertőző Dózis Átlagos Súlygyamikro(ppm a fertőzési rapodás organizmusok tápanyagban) szint (%) Eímeria tenella 100 0.0 95 75 0.3 63 50 1.3 103 Eimeria 25 2.7 80 acervulina 100 0.0 100 75 0.0 100 50 0.0 70 25 1.2 40 A találmány szerinti eljárást az alábbi példákon részletesen bemutatjuk. 1 példa 1 Inokulum előállítás Az alábbi alkotórészeket tartalmazó steril vizes táptalajt készítünk: Alkotórész g/1 Glükóz 20 Szójaliszt 10 NZ amin YTT* 5 Nátriumszulfát 0.5 Kobaltklorid 0.002 Kálciumkarbonát 2 100 ml táptalajt 300 ml-es rázóedénybe helyezünk és 30 percig 0,1 MPa mellett, 120°C-on sterilizáljuk. Ezután lehűtjük és Actinomadura sp. ATCC 39697 (596-33) ferde tenyészetről vett vegetatív sejtszuszpenzióval inokuláljuk. A rázóedényeket forgó 38 és 63 mm elmozdulású, 150-200 ford/perc sebességű rázógépen 28°C- on 3-5 napig rázatjuk. Hasonló eredménnyel alkalmazhatjuk az alábbi táptalajt is: Alkotórész g g/1 Szerelóz 10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7
