194311. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új savas policiklusos éter-antibiotikumok előállítására
1 2 A találmány tárgya eljárás CP-63,517 jelzésű új antlotlkus anyag előállítására, melyet az Okyama közigazgatási terület (Japán) talajmintájából Izolált és N479-34 kódszámmal ellátott Streptomyces nemzetség új törzsének fermentációja útján különítettünk el. A találmány szerinti új antibiotikum szerkezetileg a savas policiklusos éter (ionofor) antibiotikumok új tagja. Ebbe az antibiotikum-családba tartozik a dianemicin (J. Antiobitics 22, 161 (1969) és 33, 137 (1980), monenzln (J. Amer. Chem. Soc. 89 5737 (1967), a szalinomlcin (J. Antibiotics 27, 814 (1974), a TM-531 antibiotikum (4,269, 971 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás), és az 53,607 antibiotikum (4,361,649 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás). A találmány szerint CP-63,517 jelzésű I általános képletű új savas policiklusos éter antibiotikumot - ahol Me jelentése metilcsoport - és gyógyszerészetileg elfogadható katinos sóit állítjuk elő, melyek számos mikroorganizmus ellen hatásosak és kokcidlózis, vékonybélgyulladás, sertés-vérhas és -emlőmirigygyulladás kezelésére, valamint sertés és marha növekedésének serkentésére, továbbá sertés és marha táplálékhasznosítási hatásfokának növelésére használhatók. A CP-63,517 antibiotikumot az Okayama japán közigazgatási területen gyűjtött talajmintából izolált új törzs tenyésztése útján különítettük el. E törzset az N497-34 kódszámmal jelöltük meg és a Streptomyces endus subsp. aureus új törzseként azonosítottuk. Az „American Type Culture Collection - nál deponáltuk 39574 nyilvántartási szám alatt. A találmány szerint előállított antibiotikum és sói alkalmasak sertés és marha táplálékhasznosításának fokozására, sertés és marha számára a fenti antibiotikumot vagy sóit tartalmazó tökéletesebb tápszert állítottunk elő, eljárást dolgoztunk ki a CP- 63,517 antibiotikumnak és gyógyszerészetileg elfogadható sóinak előállítására. A Streptomyces endus subsp. aureus új törzsét vizes tápközegben tenyésztve és a Streptomyces endus subsp. aureus, ATTCC- 39574 biológiailag tiszta tenyészetét állítottuk elő. A találmány szerinti antiotikus anyagot az Okayama japán közigazgatási területen gyűjtött talajmintából izolált, N497-33 jelzésű törzs fermentációja útján állítjuk elő. Az N497-34 tenyészetet Liang H. Huang (Central Research, Pfizer Inc., Groton, Cennectiut, USA) jellemezte és azonosította az alábbiak szerint. A vizsgálat során az N497-34 tenyészet Streptomyces fajtának bizonyult a hifák keskenysége, légmicéliumok képződése és a légmicéliumon láncszerűen elhelyezkedő spórák alapján. Az N497-34 tenyészetet ferde táptalajról ATCC 172 folyadékba oltjuk át és rázógépen 4 napig 28°C- on tenyésztjük. Utána 20 percig centrifugáljuk, steril desztillált vízzel háromszor mossuk és az Actinomycetales család tagjainak azonosításához használt tápközegekre oltjuk rá. A tenyészetet 28*C-on inlcubáljuk és az eredményeket különböző időpontokban, de leginkább a 14. napon értékeljük. A színeket a szokásos terminológia szerint írjuk ,1e, de az exakt színeket a „Color Harmony Manuel ’ (4. kiadás) színmintáival való összehasonlítás útján határozzuk meg. A teljes sejtek aminosav- és cukorelemzésére Becker és munkatársai (Appl. Microbiol. 12,421-423 (1964)), és Lechevalier (J. Láb. Clin. Med. 71, 934-944 (1968)) módizeréí használjuk, összehasonlítás céljából Streptomyces endus subsp. aureus NRRL 12174 törzset .kaptunk a „Northern Regional Research Centerétől (NRRC) (U.S.D.A., Peoria, minois). A tenyészet jellemzésére használt tápközegek és az összetételükre szolgáló hivatkozások az alábbiak: 1. Trípton-élesztőkivonat táptalaj (ISP * 1 médium, Difco). 2. Élesztőkivonat-malátakivonat agar — (ISP ♦ 2 médium, Difco). 3. Zabliszt agar - (ISP ♦ 3 médium, Difco). 4. Szervetlen sók-keményítő agar - (ISP ♦ 4 médium, Difco)-5. Glicerin-aszparagin agar - (ISP ♦ 5 médium, Difco). 6. Pepton-élesztőkivonat-vasagar - (ISP ♦ 6 médium, Difco) 7. Czapek-szacharóz agar - S. A. Waksman, The Actinomycètes, 2. kötet, 1. sz. médium, 328. oldal, 1961. 8. Glükóz-aszpargin agar - ugyanott, 2. sz., 328. oldal. 9. Benett-agar - ugyanott, 30. sz. médium, 331. oldal. 10. Emerson-agar - ugyanott, 28. sz. médium, 331. oldal. 11. Tápagar — ugyanott, 14. sz. médium, 330. oldal. 12. Gordon és Smith féle tirozin agar — R. E. Gordon és M. M. Smith, J. Bact. 69, 147-150 (1955). 13. Kazein agar - ugyanott. 14. Kalcium malát agar — S. A. Waksman, Bact. Rév. 27, 1-29.(1957). 15. Zselatin - R. E. Gordon és J. M. Mihm. J. Bact. 73, 15-17(1957). 16. Keményítő - ugyanott. 17. Szerves nitrát táptalaj - ugyanott. 18. Dextróz nitrát táptalaj - S. A. Waksman, The Actinomycètes, 2. kötet, 1. sz. médium, 328. oldal, 1961, a 30 g szacharózt 3 g dextrózzal helyettesítve és az agart elhagyva. 19. Burgonya répa agar - M. P. Lechevaler, J. Láb. and din. Med. 71, 934-944 (1968), de csak 30 g burgonyát, 2,5 g répát és 20 g agart használva. 20. 2% csapvíz agar. 21. Soványtej - Difco. 22. Cellulóz hasznosítás -a) H. L. Jensen, Proc. Iinn. Soc. N. S. W., 55, 231—248 (1930). b) M. Levine és H. W. Schoenlein, A Complication of Cultura Media, 2511. számú médium, ' Difco. 23. Szénhidrátok - ISP ♦ 9 médium, Difco. 24. Hőmérséklettartomány - PS ♦ 2 médium plusz 50 ml kókusztej per liter médium. Az N497-34 tenyészet a következő jellegzetességeket mutatja a színek és a teljes sejtek aminosav- és cukoranaÖzise alapján, a fentebb megadott eljárásokat alkalmazva. Élesztőkivonat-malátakivonat agar - Növekedés, jó, fehér, halványsárga - halvány rózsaszínes szürke (Ica, 1 l/2ca, közel a 3dc, 5dc, 5fe szürke sorozathoz), kiemelkedő, ráncos, légmicéllum a felszínnel azonos; fonák barna (2pg, 3ne), oldható pigment sárgásbarna (21c, 3nc). Zabliszt agar - Növekedés mérsékelt - jó, szürkésfehér, szürke - rózsaszínes szürke ( közel a 3fe, 194 31 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
