194310. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új TAN-588 antibiotikum alkálifém-, alkáliföldfém-, ammóniumsójának és N-dezacetilezett-származékának előállítására
1 194 310 2 A találmány tárgya eljárás új antibakteriális hatású antibiotikum előállítására. Ismeretes, hogy az antibiotikumok gátolják a baktérium-sejtfal bioszintézisét. Ismert antibiotikumok például a Nature, 289 590-591, (1981) irodalmi helyen ismertetett szulfazecin és izoszulfazecin, valamint a Nature, 291, 489-491 (1981) irodalmi helyen ismertetett SO 26 180, 26 700, 26 823, 26 875, 26 970, 26 812 stb. jelzésű antibiotikumok. Ezek az ismert antibiotikumok elsősorban a Gram negatív baktériumok ellen hatnak. A J. Antibiotics, 36, 1245 -1251: 1252-1257, (1983) irodalmi helyen további SO 28 332, 28 502, 28 503 stb. jelzésű antibiotikumokat ismertetnek. Célul tűztük ki űj antibiotikumok előállítását. A cél elérése érdekében nagyszámú mikroorganizmust izoláltunk táptalajból, majd meghatároztuk a mikroorganizmusok által termelt antibiotikumok jellemzőit. Úgy találtuk, hogy bizonyos mikroorganizmusok, amelyek az Empedobacter vagy Lysobacter nemzetségbe tartozó új fajok, megfelelő táptalajon tenyésztve, Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok ellen ható új antibiotikumot képesek termelni. Az új antibiotikumot alkálifém-, alkáliföldfémvagy ammóniumsó formában izoláltuk, fiziko-kémiai és biológiai jellemzőit meghatároztuk és „TAN-588 jelzéssel láttuk el. Felismertük, hogy a TAN-588 antibiotikum molekulája N-acetil- és karboxil-csoportokat tartalmaz, amelyekből az acetilcsoportok eltávolíthatók. Úgy találtuk továbbá, hogy egy az Empedobacter vagy Lysobacter nemzetségbe tartozó mikroorganizmus a TAN-588 antibiotikum N-dezacetilezett-származékát is tudja termelni. Felismertük azt is, hogy abban az esetben, ha egy Acinctobacter nemzetségbe és Egy Empedobacter vagy Lysobacter nemzetségbe tartozó mikroorganizmust táptalajon tenyésztünk, akkor a TAN-588 antibiotikum N-dezacetilezett-származékát nagyobb mennyiségben termelhetjük, mint ha csak az Empedobacter vagy Lysobacter nemzetségbe tartozó mikroorganizmust használjuk. Találmányunk tárgya eljárás TAN-588 antibiotijum alkálifém-, alkáliföldfém- ammóniumsóinak /s Ndezacetilezett származékának előállítására, amely eljárás folyamán az ' Empedobacter lactamgenus YK-258 vagy a Lysobacter albus sp. nov. YK-422 antibiotikumokat vagy TAN-588 antibiotikum és/ vagy N-dezacetilczett-származékának termelésére képes mutánsaikat vagy variánsaikat megfelelő táptalajon tenyésztjük, majd azt feldolgozva az antibiotikumot kinyerjük, továbbá eljárás N dezacetilezett TAN-588 antibiotikum előállítására, amely eljárás folyamán egy Empedobacter lactamgenus YK-588 vagy Lysobacter albus sp. nov. YK-422 mikroorganizmust vagy ezek TAN-588 antibiotikum és/vagy N dezacetilezett származékának termelésére képes mutánsait vagy variánsait és az Acinetobactcr sp YK-504 mikroorganizmust kevert tenyészetben tenyésztjük, majd a táptalajból az N dezacetilezett TAN-588 antibiotikumot kinyerjük. A TAN-588 antibiotikum és/vagy N-dezacetilezett-származékának termelésére használt Empedobacter lactamgenus új mikroorganizmus faj. Az Empedobacter lactamgenus YK-258 törzset Japánban Shimane Prefecture, Masuda városban gyűjtött táptalajból izoláltunk.- Az YK-258 törzs mikrobiológiai jellemzői a következők: (a) Morfológiai jellemzők: Szilárd, ferde táptalajon 24 C hőmérsékleten öt napon át történő inkubálás után a sejtek 0,4- 0,6 pm átmérőjű és 2,0-3,0 pm hosszúságú megnyúlt pálcika alakúak, esetenként 12-30 pm hoszszúságú szálformájúak. Ostorosodás sejt mozgással nem figyelhető meg, a sejtek nem spórásodnak, Gram-negatívok és savállók. (b) Szaporodás különböző tápközegekben A tenyésztést 24°C hőmérsékleten, a megfigyelést 1-14 nap elteltével végezzük. 1) Szilárd táptalaj csészében. A kialakult telepek áttetszők, halványsárga színűek, köralakúak, redőzött felületűek, sima széllel, nincs diffúzióképes pigment. 2) Szilárd ferde táptalaj. A telepek jól szaporodnak, színűk a sárgától a borostánykő színig változik. 3) Folyékony táptalaj. A táptalaj zavaros, csapadék képződik, a felszínen hártyásodás figyelhető meg. 4) Szúrt tápzselatinos tenyészet. Szaporodás főleg a felső részben figyelhető meg, kráter-formájú elfolyósódással. Az elfolyósítási aktivitás viszonylag gyenge. 5) Lakmusz. A lakmuszt nem redukálja, peptonizáció és koaguláció figyelhető meg. (c) Fiziológiai jellemzők: 1) Nitrátok redukciója: negatív 2) Denitrifikálási reakció: negatív 3) (MR) Metilvörös vizsgálat: negatív 4) (VP) Voges-Proskauer vizsgálat: negatív 5) Indol termelés: negatív 6) Hidrogén-szulfid termelés (TSI agar és ólom-acetát papír): negatív 7) Keményítő hidrolízise: negatív 8) Citrát hasznosítás (Kóser, Christensen, és Simrnon féle tápközegben): pozitív 9) Szervetlen nitrogén-források hasznosítása: i) Kálium-nitrát: negatív ii) Ammónium-szulfát: negatív 10) Pigmen(képzés (King A és B és mannitélesztő-kivonat táptalajon): diffúzióképes pigmentképzés nem figyelhető meg. 11) Urcáz: negatív 12) Oxidáz: negatív 13) Kataláz: negatív 14) Szaporodási tartományok: i) pH: az optimális pH tartomány 5,8—6,6 között van, bár a mikroorganizmusok szaporodnak 5,4-8,5 pH-érték mellett is, táptalaj: 0,1% glükóz, 0,01% élesztőkivonat, 0,1% ammónium-szulfát, 0,1% nátrium-klorid, 0,05% magnézium-szulfát (heptahídrát) és 0,1 mólos foszfát-puffer (külön-külön sterilizálva), ii) hőmérséklet: az optimális hőmérséklettartomány 24-31°C között van, de a mikroorganizmusok 20—32°C hőmérsékleten szaporodnak. táptalaj: folyékony táptalaj: 15) Oxigén igény : aerob 16) O-F (oxidációs-fermentációs) vizsgálat (Hugh. Leífson módszer): nem reagál 17) Cukorból sav és gáz termelése és ezek hasznosítása. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
