194305. lajstromszámú szabadalom • Eljárás DNS szekvenciák, rekombináns DNS molekulák és humán interferon tipusú polipeptidek előállitására
1 194 305 2 alábbi kultúrákat 1980. március 27-én Rockvflleben (Maryland), az American Type Culture Collection kultúra gyűjteményben helyeztük letétbe: G: E, coli HB101 (Z-pB322(Pst)/HcIF-II-206) H E. coli HB101 (Z-pBR322(Pst)/HcIF-SN35 AHL6). A HchrIF-A-J jelölésű, a találmány szerinti eljárással kapott mikroorganizmusokra példaként 1980. október 1-én Göttingenben (NSZK) a Deutsche Sammlung von Mikroorganizmen kultúra gyűjteményben, DSM 1914-23 azonosítási számok, a következő kultúrákat helyeztük letétbe: A: E. coli HBIOi-ben chr3 szubklónozott HlndlII fragmense B: E. coli HBIOi-ben chrl2 szubklónozott EcoRI fragmense C: E. coli HBIOi-ben chrl2 szubklónozott Hindin fragmense D: E. coli HBIOi-ben chrl3 szubklónozott EcoRI fragmense E; E. coli HB101-ben chr23 szubklónozott EcoRI fragmense F: E. coli HBIOi-ben chr23 szubklónozott Hindlli fragmense G: E. coli HBIOi-ben chr26 szubklónozott EcoRI fragmense H: E. coli HB 101 -ben chr26 szubklónozott Hindlli fragmense I: E. coli HB 101-ben chr35 szubklónozott Hindlli/ Bamlil fragmense J: E. coli HBIOi-ben chr35 szubklónozott BamHI fragmense A. HchrlF-K-0 és HcIF-I-K jelölésű, a találmány szerinti eljárással kapott mikroorganizmusokra példaként 1980. december 15-én Rockville-ben (Maryland) az American Type Culture Collection kultúra gyűjteményében, 31760-31769 ATTC azonosítási számon, alábbi kultúrákat helyeztük letétbe: K: E. coli HBIOi-ben chr23 szubklónozott Tac-Tac fragmense L: E. coli HB101 chrlO 1 szubklónozott BG1II-BglII fragmense M: E. coli HB101 chrlOr szubklónozott Hindlli-Hindlli fragmense N: E. coli HB101 chr26 szubklónozott BglII-BglII fragmense O: E. coli HB101 chr30 szubklónozott HindlII-HindlII fragmense P: E. coli HB101 chrl3 szubklónozott BglII-Tac fragmenese O: E. coli HB101 chrl6 1 szubklónozott BtlII-Tac fragmense HcIF-I: E. coli DS410 (C8-IFN-02) HcIF-J: E. coli DS410 (LAC-AUG(a2) HcIF-K: E. coli DS410 (/TLac-AUG(a2)) SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás humán IFN-a peptidet kódoló DNS szakasz előállítására, azzal jellemezve, hogy huniám lcukocitákat valamely vírussal kezelünk, az így kapott anyagot proteolitikus enzimmel kezelünk, az így kapott keverékből az RNS-t oligo(dT) oszlopon izoláljuk, kívánt esetben tisztítjuk, a kapott poli(A)RNS keveréket dGTP, dCTP, dTTP és dATP jelenlétében reverz transzkriptázzal kezeljük, a kapott egyszálú cDNS keveréket előnyösen extrakcióval, kromatográfiával, etanolos kicsapással és centrifugálással tisztítjuk, a tisztított cDNS keveréket dGTP, dCTP, dTTP és dATP jelenlétében DNS-polimerázzal kezeljük, a keletkezett DNS t kinyerjük, S, nukleázzal kezeljük, és a keletkezett kettősszálú cDNS keveréket kinyerjük, és a keverékből az IFN-a peptidet kódoló DNS-eket kiválasztjuk oly módon, hogy a) a cDNS keveréket valamely hordozóba iktatjuk, a keletkezett keverékkel E. coli törzseket transzformálunk, a transzformánsokat vegyszerrezisztencia alapján elkülönítjük, a transzformánsok közül az IFN-a cDNS szekvenciát tartalmazó kiónokat RNS szelekciós hibiidizáló vizsgálati módszerekkel kiválasztjuk, ezekből a transzformánsokból plazmidokat, és ezekből a plazmidokból DNS szakaszt izolálunk ismert módszerekkel, vagy b) a cDNS keveréket már ismert, IFN-a peptidet kódoló DNS-ekhez lúbridizáljuk, és a megfelelő DNS szakaszt kiválasztjuk. (Elsőbbsége: 1980.01.08). 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal j e 1 lern e z v e, hogy Z-pBR322(Pst)/HcIF-2h (DSM 1700), Z-pBR322(Pst)/HclF-SN35 (DSM 1701), Z-BR3 22(Pst)/Hd F-SN4 2 (DSM 1702) vagy Z-pKT287(Pst)/HcIF-2h-AH6 (DSM 1703) DNS-beiktatásokat vagy ezekhez hibridizálódó DNS szakaszokat vagy ezen DNS beiktatások vagy szakaszok szokásos genetikai kód degenerációval létrejövő változatait izoláljuk, illetve választjuk ki. (Elsőbbsége: 1980. 01.08.) 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hibridizálódó DNS szakaszként Z-pBR322(Pst)/HcIF-II-206 (ATCC 31633) vagy Z-pBR322(Pst)/HcIF-SN35-AHL6 (ATCC 31634) DNS-beiktatásokat vagy ezekhez hibridizálódó DNS szakaszokat vagy ezen DNS-beiktatások vagy szakaszok szokásos genetikai kód degenerációval létrejövő változatait izoláljuk, illetve választjuk ki. (Elsőbbsége: 1980. 04.03.) 4. A 2. vagy 3. igénypont szerinti eljárás, azzal j ellemezve, hogy hibridizálódó DNS szakaszként Hif-chr3 Hindlli fragmensét (DSM 1914), Hif-chrl2 EcoRI fragmensét (D§M 1915), Hif-chrl2 Hindlli fragmensét (DSM 1916), Hif-chrl3 EcoRI fragmensét (DSM 1917), Hif-chr23 EcoRI fragmensét (DSM 1918), Hif-chr23 Hindlli fragmensét (DSM 1919), Hif-chr26 EcoRI fragmensét (DSM 1920), Hif-chr26 Hindlli fragmensét (DSM 1921), Hif-chr35 HindlII-BamHI fragmensét (DSM 1922), Hif-chr35 BamHI fragmensét (DSM 1923), Hif-chr23 Tac-Tac fragmensét (ATCC 31760), Hif-chrlOl BglII-BglII fragmensét (ATCC 31761), Hif-chrlOr HIndlII-Hindlll fragmensét (ATCC 31762), Hifchr26 BglII-BglII fragmensét (ATCC 31763), Hif-chr30 HindlII-HindlII fragmensét (ATCC 31764), Hif-chrl3 BglII-Tac fragmensét (ATCC 31765) vagy Hif-chrlól BglII-Tac fragmensét (ATCC 31766) jelentő DNS-beiktatásokat vagy ezekhez hibridizálódó DNS szakaszokat vagy ezen DNS-beiktatások vagy szakaszok szokásos genetikai kód degenerációval létrejövő változatait izoláljuk, illetve választjuk ki. (Elsőbbsége: 1981.01.08.) 5. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal ellemezve, hogy az 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 31
