194281. lajstromszámú szabadalom • Kémiai eljárás az L 17392 antibiotikum (deglukoteikoplamin) és savaddíciós sói előállítására
1 ki lehet szerelni ezekt a vegyületeket folyadékpermet (spray) vagy inhaláló szerek, cukorka-tabletta, szájvizek vagy torok-ecsetelő készítmény formájában. A szem- és fülgyógyászathoz a készítményeket folyékony vagy fél-folyékony állapotban lehet szolgáltatni. A helyi alkalmazáshoz ki lehet szerelni hidrofil vagy hidrofób alapon balzsamként, kenőcsként, krémként, öblítővízként festékként vagy púderként, Az injekciókhoz használt kompozíciók lehetnek szuszpenzió, oldat vagy emulzió formájában olajos vagy vizes hordozóanyagokban és tartalmazhatnak formakialakító szereket is, pl. szuszpendáló, stabilizáló és/vagy diszpergáló szereket. Egy másik módszer szerint az aktív alkotórész lehet visszaalakításra kész por formájában, amelyet a beadás idején megfelelő hordozóanyaggal, pl. steril vízzel hoznak össze. A beadandó alapanyag mennyisége különböző tényezőktől függ,pE a kezelendő személy vagy állat mérete és állapota, a beadás módja és gyakorisága és a betegséget okozó szer mibenléte. A deglükoteikoplanin és gyógyászatiig elfogadható savakkal és bázisokkal képzett sói általában napi dózisban 0,1-20 mg aktív hatóanyag/testtömegkilogramm közti mennyiségben hatnak, előnyösen 2-4 beadásra elosztva naponta. Különösen kívánatos készítmények azok, amelyeket 5-250 mg/egység hatóanyagtartalmú adagok formájában készítenek. Gyógyászati kompozíciók előállítását bemutató reprezentatív példák a következők: Parenterális oldatot készítünk olyan módon, hogy 100 mg deglükoteikoplanin nátrium sót feloldunk 2 ml injekdókészítéshez alkalmas steril vízben. Parenterális oldatot készítünk olyan módon, hogy 250 mg deglükoteikoplanint feloldunk 3 ml injekciókészítéshez alkalmasteril vízben. Helyi kezelésre alkalmas balzsamot készítünk 200 mg deglükoteikoplanin, 3,6 g polietilénglikol 4000 (U.S.P. minőség), 6,2 g polietilénglikol 400 (U.S.P. minőség) összekeverésével. Gyógyszerként jelentkező aktivitásuk mellett a jelen találmány szerinti vegyületek használhatók állati növekedést elősegítő szerként is. Ebből a célból egy vagy több jelen találmány szerinti vegyületet szájon át beadagolunk megfelelő takarmányban beadva. Az alkalmazott exakt koncentráció a takarmányban olyan, amely ahhoz szükséges, hogy az aktív alkotórész növekedést elősegítő mennyisége bejusson, amikor az állat normális mennyiségű takarmányt fogyaszt. A találmány szerinti aktív vegyület beadását az állati takarmányba előnyösen az aktív vegyületek hatásos mennyiségét tartalmazó megfelelő takarmány premix készítésével és a premixnek a tef .'s takarmányadagba bekeverésével lehet végrehajtani. Egy más módszer szerint egy, az aktív alkotórészt tartalmazó köztes koncentrátumot vagy takarmánykiegészítőt lehet belekeverni a takarmányba. Azok a módok, amelyekkel az ilyen takarmányprenáxek és teljes takarmányadagok készíthetők és beadagolhatok, referenciául szolgáló könyvekben varinak leírva (mint pl. „Applied Animal Nutrition, (Alkalmazott Állattáplálás), W.H. Freedman és Társa, San Francisco, Amerikai Egyesült Államok, 1969, és „Livestock Feeds and Feeding” (Nyájak takarmánya és takajmányozás), O and B Books (O és B Könyvek) 2 Corvallis, Oregon, Amerikai Egyesült Államok, 1977). Ezek az irodalmi helyek a jelen bejelentés referencia helyeiként szolgálnak. A következő példák bemutatják azt a módot, amellyel a találmányt gyakorlatba lehet venni, de a példákat nem azért készítettük, hogy korátozzák a találmány általános oltalmi körét. 1. példa Deglükoteikoplanin készítése teikoplanin komplexből 10 g teikoplanin komplexet (azaz olyan antibiotikum-komplexet, amely teichomicin Aj, A2 és A3 alkotórészeket tartalmaz, és amelyet az ATCC 31121 törzs fermentációjával nyertek a 4,239,751 lajstromszámú amerikai egyesült államok-beli szabadalmi leírás szerint) feloldunk 90%-os vizes trifluor-ecetsavban (200 ml) és kb.80 C hőmérsékleten melegítjük 2 órán át. Szobahőmérsékletre lehűtés után a reakdókeveréket jéggel hűtött dietil-éterbe öntjük (1 liter). A nyert csapadékot szűréssel összegyűjtjük, dietil-éterrel mossuk, majd levegőn szárítjuk, így nyerjük a deglükoteikoplanin trifluor-ecetsawal képzett savaddídós sóját (6,3 g). Ebből a nyers anyagból 5,3 g-ot feloldunk 0,2%os ammónium-formiát/metanol/n-butanol 1:2:3 arányú keverékében (1 liter) és szilánozott szilikagélt adunk hozzá (20 g, 0,06—0,2 mm, szilánozott szilikagél 60, Merck). Megfelelő összekeveredés után az oldószert vákuum alatt eltávolítjuk és a maradékot 750 g szilánozott szilikagéllel (0,06—0,2 mm, Merck) vízben elkészített kromatográfiás oszlop tetejére helyezzük el. Az oszlopot 0,6% vizes ammónium-formiát és acetonitril 9:1 arányú keverékével kifejlesztjük. Az eluátumot eldobjuk, majd az eluálást folytatjuk acetonitril/víz lineáris gradienssel, amelyben az acetonitril-víz arány 1:9-től 3:7-ig változik, 200 ml/óra sebességgel 30 órán át. 25 ml-es frakciókat szedünk és HPLC-vel megvizsgáljuk ezeket. A deglükoteikoplanint tartalmazó frakdókat (200—250) egyesítjük és n-butanolt adunk hozzá. Keverés után a keveréket kis térfogatra koncentráljuk, dietil-étert adunk hozzá és a szilárd anyagot, amely elkülönülj szűréssel összegyűjtjük, dietiléterrel mossuk és 40°C hőmérsékleten vákuum alatt szárítjuk, 0,9 g lényegében tiszta deglükoteikoplanint nyerve ki. A kristályos deglükoteikoplanint a következő eljárás szerint nyerjük: 0,9 g lényegileg tiszta deglükoteikoplanin 250 ml víz/acetonitril 90:10 (térf./térf.) arányú keverékével képzett szuszpenziójához In NCl-t adunk hozzá cseppenként szobahőmérsékleten 1,7 pH érték eléréséig. Az így nyert oldatot egy szilánozott szilikagél oszlopra visszük (200 g, 0,06-0,2 mm, Merck), 1%-os vizes ammónium-formiátban stabilizáljuk 20 ml/óra sebességnél. Az oszlopot 300 ml desztillált vízzel eluáljuk, amelyet azután elöntünk, majd acetonitril vízzel képzett lineáris gradiensével fejlesztjük ki (40%-ról 70%ra emelkedő acetonitril-tartalommal) 70 ml/óra sebességgel 30 órán át. 7 ml frakciókat szedünk és HPLG- vei figyeljük ezeket. A tiszta deglükoteikoplanint tartalmazó frakciókat (221-239) egesltjük és szobahőmérsékleten állni hagyjuk 24 órán át. A kristályos szilád csapadékot szűréssel összegyűjtjük, kis mennyiségű (10 ml) acetonitrillel, majd die tű-éterrel (100 ml) 194.281 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 9
