194281. lajstromszámú szabadalom • Kémiai eljárás az L 17392 antibiotikum (deglukoteikoplamin) és savaddíciós sói előállítására
1- foszfát-pufferban (pH 7,4) miA = 277nm(E}^m =70,3), d. ) infravörös abszorpciós spektruma nujolban a következő jelentősebb abszorpciós maximumokat mutatja (cm-1): 3700-2000, 2970-2850 (nujol), 1655, 1610, 1595, 1515, 1490, 1460 (nujol), 1375 (nujol) 1300, 1230,1145, 1060,1020,970, 890, 850 820, 720 (nujol), e. ) ele ni analízise, miután a mintát előzetesen inert atmoszférában 140°C hőmérsékleten szárítottuk tömegveszteség - 7,8%), a következő hozzávetőleges százalékos összetételt mutatja (átlag): szén: 55,46%, hidrogén 4,50%, nitrogén 7,20%, klór 4,67%, hamu 0,2%, f. ) Re értékei az alábbi TLC rendszerekben a következőit: Eluáló rendszer (térf./térf.) Rf érték I. Acetonitrill/víz 75:25 0,32 (Silicagel Merck 60 F2 54) II. Acetonitril/5%-os vizes nátriumszulfát 30:70 0,61 (Silicagel Merck silanized 60 F254), a megjelenítést 254 nm-es UV fénnyel, vagy 3%-os etanolos ninhidrinnel vagy 1%-os metanolos fluoreszcaminnal végezve, g. ) retendós ideje (tj^) 8,3 perc, amikor fordított fázisú HPLC-vel elemezzük, 150 x 4,0 mn>es Zorbax® ODS (5-6 in) oszlopot hasznává (Zorbax a Dupont Co. cég védjegyzett neve egy bktadecil-szilán szilikagél mátrixra) és B oldat A olatban 40 perc alatt 0%-ról 50%-ra növekedő lineáris gradiensével eluálva, 2 ml/perc áramlási sebességgel, ahol Az A oldat összetétele: 25 mmól/literes NaH2P04 oldat/acetonitril 3:7 pH 6,0 értékre pufferolva 0,1 n NaOH-val, belső standardként 3,5-dihidroxi-toluolt alkalmazva, ahol ír értéke 5,60 perc, h. ) a 270 MHz-nél, DMSO-dç-ban 60 C hőmérsékleten, 20 mg/ml minta-koncentrációval felvett1HNMR spektrumának (belső standard: TMS, = 0,00 ppm) I)20 kicserélődés és szelektív szétcsatolási kísérletek után nyert néhány adata a következő ( ppm, sokszorozódás): 1,88, s, 2,85, d, 3,5 dd, 3-4, 4,20, d, 4,48 d, 4,50, d, 4,62, s, 4,96, ddd, 5,18, d, 5,31 ,s, 5,35, d, 5,39, s, 5,68, d, 5,71, s, 6,20, d, 6,41, s, 6,51. s, 6,56, s, 6,74, d, 6,77, s, 6,80, s, 6,80, d, 6,98, d, 7,08, s, 7,15. d, 7,21, d, 7,28, d, 7,35, d, 7,50, d, 7,56, d, 7,64, d, 7,73, d, 7,86, s, 8,42, d, i. ) potenciometriás titrálási profilja három titrálási lejtőt mutat 1/2 pH értékekkel pH 5,0-nál (egy ekvivalens), pH 7,0-nál (egy ekvivalens) és pH 11-nél (öt ekvivalens) metil-celloszolv/víz 4:1-ben 0,01n HCl-el titrálva a vizsgált vegyület oldatát, amely azonos oldószerben 0,01n NaOH fölöslegét tartalmazza, l. ) egy savas funkciója van, amely képes sókat képezni, m. ) egy bázisos funkciója van, amely képes sókat képezni, n. ) két cukor-maradéka van, amelyek N-acetil-D- glükózaminnal és D-mannózzal azonosak. A fizikokémiai adatok alapján és összehasonlítva más glikopeptid-jellegű antibiotikum vegyü letekkel, mint pl. vankomicinnel és risztocetinnel, ideiglenesen 1 IV képletnek megfelelő szerkezetet tulajdoníthatjuk az L 17054 antibiotikumnak, ahol a képleten belül R‘ jelentése V képletű csoport. 12 2 b.) Deglükoteikoplanin előállítása. 2,0 g nyers L 17054 antibiotikum 50 ml 90%-os vizes tri fluor-e cetsavval képzett oldatát 80°C hőmérsékleten két órán át melegítjük. Szobahőmérsékletre lehűtés után a reakciókeveréket 400 ml jéggel hűtött dietil-éterbe öntjük. Az így nyert csapadékot leszűrjük, dietil-éterrel mossuk és levegőn szárítjuk, így nyelünk nyers deglükoteikoplanint trifluor-ecetsavas addíciós sója formájában (1,12 g), amelyet azután az 1. példában leírt módon tisztítunk, 0,7 g kristályos tiszta deglükoteikoplanint állítva elő. 4. példa Deglükoteikoplanin előállítása teikoplanin komplexből 10 g teikoplanin komplexet (azaz olyan antibiotikum komplexet, amely teichomicin Aj, A2 és A3 alkotórésezeket tartalmaz, és amelyet az AJCC 31121 törzs fermentációjával nyertek a 4,329,751 lajstromszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint) szuszpendálunk 80 ml benzil-alkoholban és 20 ml 37%-os jtömeg/térf,./ vizes HCl-t adunk a keverékhez kb. 40 C hőmérsékleten. A keveréket vákuumban (20 Hgmm 2,63.103Pa) keverjük 12 órán át 60 C hőmérsékleten, miközben minden másfél órában 5 ml 37%-os vizes HCl-ből és 15 ml benzil-alkoholból álló keveréket adunk a reakciókeverékhez. A reakció yégén a keveréket szobahőmérsékletre hűtjük és 1 liter dietil-étert adunk hozzá. A nyers csapadékot összegyűjtjük, acetonnal és dietil-éterrel mossuk, majd vákuumbán szárítjuk 40°C hőmérsékleten egy éjszakán át, 9,2 g nyeis terméket kapunk. Ezt a nyers terméket feloldjuk metanol és 0,ln HC1 3:2 (térf./térf.) arányú keverékben (250 ml) és az így nyert oldathoz egy liter víz/etil-acetát/n-butanol 4:5 :1 (térf./térf.) keveréket adunk. A vizes fázis pH-ját 8,5-re állítjuk be In NaOH-val és a szerves réteget ezután elöntjük. A vizes fázist 750 g szilánozott szilikagéllel (0,06—0,2 mm, Merck) vízben készített kromatográfiás oszlop tetejére visszük. Az oszlopot 0,6%os vizes ammónium-formiát és acetonitril 9:1 arányú keverékével fejlesztjük ki. Az eluátumot elöntjük, majd az eluálást folytatjuk egy eluáló keverék lineáris gradiensével, amelyet a következő keverékek 3-3 literéből állítunk össze: acetonitril/víz 1:9 acetonitril/víz 3:7, az eluálás sebességét 200 ml/órára állítjuk be. 25 ml-es frakciókat szedünk és HPLC-vel megvizsgáljuk ezeket. A deglükoteikoplanint tartalmazó frakciókat (200 —250.) egyesítjük és n-butanoit adunk hozzá. Keverés után a keveréket kis térfogatra koncentráljuk, dietil-étert adunk hozzá, és a szilárd anyagot, amely elkülönül, szűréssel összegyűjtjük, dietiléterrel mossuk és 40°C hőmérsékleten szárítjuk vákuum alatt, 1,5 g lényegileg tiszta deglükoteikoplanint nyerve ki. 5. példa Deglükoteikoplanin készítése teikoplanin A2 alkotórészből 5 g teikoplanin A2 alkotórészből és teikoplanin A3 alkotórészből áll (80 tömeg% A2 alkotórész, 10% tömegé A3 alkotórész, a fennmaradó rész vízből és ásványi sókból áll), szuszpendálunk 80 ml 1-oktanolban 194 281 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
