194225. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11-oxo-11H-pirido [2,1-b]kinazolin-karbonsav-származékok és e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 194 225 2 5 mg Evans kék festéket tartalmazó 1 ml vizes oldatot fecskendezünk be intravénásán. Az állatokat 40 perc múlva leöljük és a hátbőrt vizsgálat céljából eltávolítjuk. Minden pörsenés hosszú és rövid tengelyét metrikus tolómércével megmérjük és minden reakcióhoz meghatározzuk az átlagos átmérőt. A teszt-vegyületet az antigénnel egyidejűleg intravénásán, vagy 5, 10, 20, 30 és 60 perccel korábban orálisan adjuk be. Az intravénás adagoláshoz a teszt-vegyületet dimetil-szulfoxidban oldjuk; olyan koncentrációjú oldatokat készítünk, amelyekből 0,1 ml használható fel 100 g állattestsúlyhoz. Az orális adagoláshoz a teszt-vegyületből vizes szuszpenziót készítünk (0,15 mól nátrium-klorid, amely 0,5% karboxi-metil-cellulózt, 0,4% Tween 80-t és 0,9% benzilalkoholt tartalmaz). A teszt-vegyületből olyan koncentrációjú szuszpenziót készítünk, hogy 0,5 ml szuszpenziót alkalmazunk 100 g testsúlyra számítva. Az orális ID5o érték meghatározása céljából a csúcs-aktivitás időpontjában logaritmikusán változó időközökben teszt-vegyület dózisokat adunk be. Az eljárás során mind a kezelt, mind a kontroll csoportok 5—5 állatból állnak. A teszt-vegyületek statisztikus elemzését a Student „t teszttel végezzük el. Az IDSo értéket Berkson J. módszerével [J. Am. Stat. Assoc. 48, 565 (1953)] számítjuk ki. j) In vitro SRS-A antagonizmus Az SRS-A antagonizmust tengerimalac ileumon határozzuk meg, az Orange és tsai által leírt módszer (Adv. Immunoi. 1969, 10, 105.) módosításával. 175-200 g testsúlyú hím tengerimalacokból izolált 1,5 cm-es ileum-szegmenseket 10 ® mól atropin-szulfátot és 10'® mól pirilamin-maleátot tartalmazó, Tyrode oldat-tartalmú szerves fürdőben felfüggesztünk. A fürdőt 37°C-on tartjuk és 95% oxigént és 5% szén-dioxidot tartalmazó eleggyel levegőztetjük. Az ileumot transzduktorhoz csatlakoztatjuk és az izotóniás összehúzódásokat szalag regisztráló segítségével feljegyezzük. 0,5 g nagyságú feszítést alkalmazunk és a szövetet a kiegyensúlyozás céljából 1 órán át pihenni hagyjuk. A tesztnél felhasznált SRS-A-t oly módon nyerjük, hogy tojásalbuminnal in vitro aktívan érzékennyé tett tengerimalacok nagymennyiségű aprított tüdőfragmensét kezeljük. Az állatok tojásalbuminnal szembeni érzékennyétételét oly módon végezzük el, hogy az antigént nátrium-klorid-oldatbjui (1 ml, 10 mg/ml) intraperitoneálisan befecskendezzük, 28- 45 nappal a reakció előtt. Az in vitro reakciót oly módon idézzük elő, hogy a tüdőszöveteket (40 mg/ml) 37°C-on Tyrode-oldatban előbb 5 percen át inkubáljuk, majd tojásalbumint (40 g/ml végső koncentráció) adunk a fragmensekhez, 10 percig reagáltatjuk, majd az SRS-A tartalmú közeget a tüdőszövettől Whatman 1. sz. szűrőpapíron való átszűréssel elválasztjuk. A szürlet SRS-A koncentrációját oly módon kalibráljuk, hogy a bioassay rendszerben adott térfogatú felülelhelyezkedő folyadék által előidézett összehúzódást összehasonlítjuk a változó hisztaminkoncentrációkkal kapott összehúzódásokkal. Egy egység SRS-A az a mennyiség, amely 5 ng hisztaminnal azonos összehúzódást idéz elő. Standardizálás, után az SRS-A-t további felhasználáshoz kis aliquot részek alakjában -80°C-on tároljuk. Az SRS-A által előidézett összehúzódást 5 percig hagyjuk kialakulni, majd a szövetet Tyrode-oldattal mossuk. Az SRS-A antagonizmus meghatározása céljából az ileumot a teszt-vegyülettel 30 másodperccel a szubmaximális reagálást előidéző SRS-A koncentráció hozzáadása előtt a teszt-vegyülettel előkezeljük, majd meghatározzuk a teszt-vegyület jelenlétében kialakuló összehúzódás amplitúdóját, végül az ileumot Tyrodeoldattal mossuk. Ennél a tesztnél a referens anyagként felhasznált 7-[3-(4-acetil-3-hidroxi-2-propil-fenoxi)-2-hidroxi-propoxi]-4-oxo-8-propil-4H-] -benzopirán-2-karbonsav IC50 értéke 3x10'“ mól. A találmányunk szerinti eljárással előállítható új vegyületeknek a fenti d)-j) tesztekben mért aktivitási adatait a II. Táblázatban foglaljuk össze. Az alábbi teszt-vegyületeket alkalmazzuk: (1) A-vegyület= N-[4-(lH-imidazol-l-il)-butil]-2-(l-metil-etil)-l 1-oxo-l lH-pirido[2,l-b]kinazolin-8-karboxamid; (2) B-vegyület = 2-(l-metil-etil)-N-[4-(3-piridil)-bu-til]-l 1-oxo-l lH-pirido[2,l-b]kinazolin-8-karboxam:rl; (3) C-vegyület= 2-(l-metil-etil)-N-]6-(3-piridi])-he-xflj-l 1-oxo-l lH-pirido[2,l-b]kinazoÚn-8-karboxamid. 5 10 15 20 25 30 35 40 8
