193973. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4'-deklórrebekkamicin és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
193973 A 4’-deklór-rebekkamicint bármely olyan hőmérsékleten termelhetjük, amely mellett a mikroorganizmus kielégítő mértékben növekszik, például 20°C és 41°C között, célszerűen körülbelül 27°C hőmérsékleten dolgozunk. A tenyésztést lombikokban, vagy különféle méretű laboratóriumi vagy ipari fermentorokban végezhetjük. Ha tartályfermentálást végzünk, akkor kívánatos, hogy egy táptalajban vegetatív inokulumot állítsunk elő oly módon, hogy a mikroorganizmus ferde agaron vagy földmintán fenntartott tenyészetével beoltjuk a táptalaj egy kis térfogatú részletét. Miután ilyen módon aktív inokulumot kapunk, ezt az inokulumot steril körülmények között átvisszük a 4’-deklór-rebekkamicin nagy méretekben való előállítására alkalmas tartályban levő táptalajba. A vegetatív inokulum előállításához használhatjuk ugyanazt a táptalajt, vagy valamely más táptalajt, mint a tartályfermentációban, 13 amennyiben a termelő mikroorganizmus ezen a táptalajon jól növekszik. A 4’-deklór-rebekkamicint általában hét napos tenyésztés útján állíthatjuk elő opti- 5 mális módon. A 4’-deklór-rebekkamicin a tenyésztés során keletkező melléktermék, amelyet a táptalajból elkülöníthetünk, és lényegében tisz- 10 ta formában állíthatunk elő az alábbi, 1. példában leírt, többlépéses eljárással, fgy a kívánt 4’-deklór-rebekkamicin elsősorban a micéliumban található, a micéliumból e vegyületet úgy különíthetjük el, hogy valamely 15 szerves oldószerrel, például tetrahidrofuránnal kivonatoljuk. A kivonatot betöményítve szilárd nyersterméket kaphatunk, amely a kívánt 4’-deklór-rebekkamicint tartalmazza. Ezt a szilárd nyersterméket ezután az alábbi 20 folyamatábrával szemléltetett, többlépéses tisztítási eljárással dolgozzuk fel: 14 SZILARD NYERSTERMÉK 1) Kloroform ás metanol 2 : t .irányú elegyeben szuszpendaljuk. 2) Diatomaföldet adunk hozza. 3) Skellysolve B-vel hígítjuk. 4) Az oldószert csökkentett nyomáson ledesztillaljuk, es 5) a porszerú maradékot Skellysolve B-vel felszuszpendáljuk, es a szuszpenziót alash-kromatografiával (gyors-kromatografiával) tisztítjuk. Skellysolve B Toluol Diklór-metán Etil-acetát Tetrahidro- Metanol------------------------furán 1/ Az oldószert ledesztilláljuk (A-jeiú maradék) 2/ Oszlop-kromatografálás 3/ Lineáris gradiens elúció, kloroformmal és metanol es kloroform 5 t 95 arányú ele'gyével, 20 darab, egyenként 200 ml térfogatú frakciót szedünk. o / o 13-16. frakció 1/ Az oldószert ledesztilláljuk (B-jelu maradék) 2/ A maradékot cimetil-szulfoxiddal kivonatoljuk 3/ Oszlop-kromatografálás, eluenskent acetonitril, metanol és 0,1 mólos ammónium-acetét-oldat 3 ; 2 : 4 arányú elegyét használjuk, először 2 1 térfogatú elÓfrakciót szedünk, majd utána 40 darab, egyenként 65 ml térfogó tű frakciót. 9-32. frakció Kloroformos rész 1/ Kloroformos kirázás Vizes rész 1 1/ Az oldatot betöményítjük 2/ A maradékhoz Skellysolve B-t adunk, és kicsapjuk ezzel a terméket H-----------------:------------------------------------Szurlet, kiöntjük Szilárd 4,-deklór-rebekkamicin A 4’-deklór-rebekkamicin biológiai hatása A 4’-deklór-rebekkamicinnek számos Gram -pozitív és Gram-negatív mikroorganizmussal szemben megnyilvánuló baktériumellenes 65 hatását az agaros táptalajon végzett kétsze-8 rés sorozathígításos módszerrel határozzuk meg. Az eredményeket a rebekkamicin aktivitásával összehasonlítva az V. táblázatban mutatjuk be.
