193973. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4'-deklórrebekkamicin és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
193973 egyesítjük, és 2 1 kloroformmal kirázzuk. Az alsó fázist elválasztjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson, egy forgó rendszerű desztilláló készüléken ledesztilláljuk. A maradékot részben feloldjuk 50 ml kloroformban, az oldódás elősegítésére az elegyet ultrahanggal kezeljük. A szuszpenziót erélyes keverés közben hozzáadjuk 1 1 Skellysolve B-hez, majd a kivált csapadékot kiszűrjük. Ily módon 606 mg 4’-deklór-rebekkamicint kapunk. Az alábbiakban megadjuk a fenti elkülönítési eljárás néhány további részletét: Analitikai nagyfelbontású folyadék-kromatográfia Az analitikai nagyfelbontású folyadék-kromatográfiás rendszert az alábbi elemekből állítjuk össze: Oldószer-szivattyú: Waters Associates Model 6000A Solvent Delivery Systes; detektor: Varian Varichrom Model VUV-10 uv/vis detektor, 254 nm-értéknél 0,1-es optikai sűrűségre beállítva; írószerkezet: Fisher Recordal Series 5000 Recorder; minta-bevitel: Waters Associates Model U6K injector; oszlop: Altex Spherisorb ODS (10 p), az oszlop méretei: belső átmérő 4,6 mm, hossz: 25 cm. Az egyes elemeket 316 számú rozsdamentes acél csövekkel (külső átmérő: 1,6 mm, belső átmérő 0,23 mm) kapcsoljuk össze, Valamennyi analízis során a négy rész acetonitrilből, három rész metanolból és három rész 0,1 mólos ammónium-acetát-oldatból álló eluenst 2 ml/perc sebességgel adagoljuk. Egyes esetekben a Varian Varichrom VUV-10 detektor helyett egy Hewlett Packard 1040A HPLC detektor-rendszert használjuk. Vékonyréteg-kromatográfia A vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatokat Analtech-gyártmányú, előre elkészített, 2,5 cm széles, 10 cm hosszú és 0,25 mm vastag szilikagél-lemezeken végezzük. A lemezeket 6,4 cm átmérőjű és 15 cm magas üveghengerekben (Whatman Inc.) futtatjuk. A futtató edényekbe 10 ml olyan oldószerelegyet teszünk, amely 5 rész metanolból és 95 rész kloroformból áll, és a lemezek futtatása előtt hagyjuk a rendszert egyensúlyba jutni. A megfuttatott, és levegőn megszárított lemezeken a foltokat 254 nm és 366 nm hullámhosszúságú ultraibolya fényben jelöljük be, mégpedig vagy egy errre a célra készített kamrában (Chromato-VUE model CC-20, Ultra-Violet Products Inc.), vagy pedig egy kézi lámpa segítségével (model UVSL-58, Ultra-Violet Products Inc.). Preparatív nagyfelbontású folyadék-kromatográfia A közepes nyomású folyadék-kromatográfiás rendszert az alábbi elemekből állítjuk össze: 23 Folyadék-szállítás: Inc. Model RP-SY 2CSC FMI Lab Pump, továbbá Inc. Model PD-60-LF FMI szivattyú a pulzálás tompítására; a minta bevitelére 3,0 mm külső átmérőjű és 1,5 mm belső átmérőjű polipropilén - -csőből egy 15 ml térfogatú hurkot készítünk, a csövet egy 8,65 cm külső átmérőjű kartonpapír csőre tekerjük; oszlop: Glenco Series 3500 Universal LC oszlop, külső átmérő: 2,67 cm, hossz: 75 cm) ; a fényelnyelés és fluoreszcencia mérésén alapuló detektor: Instrumentation Specialties Co. Model UA-5, egy 6-os típusú optikai egységgel; folyadékára m-megszakítás: Instrumentation Specialties Co. Model 590; és frakciószedő: Instrumentation Specialties Co. Model 328. Az egyes elemeket 3,0 mm külső átmérőjű és 1,5 mm belső átmérőjű polipropilén- és tefloncsövekkel, valamint Glenco-gyártmányú, többcélú összekapcsoló elemekkel és szelepekkel kapcsoljuk össze, a fenti sorrendben. A Glenco series 3500 Universal LC-oszlopot a megadott adszorbensnek a megadott oldószerrel készült szuszpenziójával töltjük fel, a szokásos módszerrel. A leülepedett töltet és az oszlop teteje közötti üres részt standard Ottawa-homokkal töltjük fel. Az eluenst azzal a maximális sebességgel szivattyúzzuk az oszlopra, amelynek hatására az ellennyomás nem haladja meg a 4,2.105 Pa értéket (körülbelül 20 ml/perc). Gradiens elúció A gradiens elúcióhoz egy Glenco-gyártmányú gradiens elúciós készüléket használunk, amely két, egymásközt azonos átmérőjű, magasságú és térfogatú kamrából áll, e kamrákat egy teflonszeleppel sorosan kapcsoljuk össze. Az egyik kamra a keverőkamra, a másik pedig a sztatikus tartály. Az elúció megkezdésekor a keverőkamrában a kevésbé poláros oldószer, a kloroform van. A polárosabb oldószerelegyet (metanol és kloroform 5:95 arányú elegye) a sztatikus kamrába töltjük. Mindkét kamrába 1,0 x 3,7 cm méretű, teflonbevonatú mágneses keverőpálcát teszünk, és ezeket mágneses keverőkkel (Thomas Model 15 Magne-matic) forgatjuk. Az eluenst a keverőkamrából 1,5 mm belső átmérőjű és 3,0 mm külső átmérőjű polipropilén csövön keresztül szivattyúzzuk a közepes nyomású nagyfelbontású folyadék-kromatográfiás rendszerbe. Hagyjuk, hogy a keverőkamrából távozó eluens helyére a sztatikus tartályban levő oldószerelegy szabadon bejusson, így alakul ki a líneiáris gradiens elúció. A 4’-deklór-rebekkamicin fizikai-kémiai tulajdonságai A 4’-deklór-rebekkamicin fizikai-kémiai tulajdonságai az alábbiak: 24 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
