193973. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4'-deklórrebekkamicin és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
193973 A jelen találmány tárgya eljárás egy új, daganatellenes hatású antibiotikum előállítására és elkülönítésére. A jelen találmány szerinti új vegyület szerkezeti rokonságban áll a rebekkamicin nevű daganatellenes szerrel, amelyet a 4 487 925 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismertet. A rebekkamicin szerkezete az (I) általános képlettel írható le, e vegyületet a Nocardia aerocolonigenes tenyésztése útján állítják elő. A jelen találmány szerinti vegyülettel bizonyos mértékben szerkezeti rokonságban áll a sztaurosporin nevű (AM-2282 jelzésű) daganatellenes szerrel, amelyet a Streptomyces staurosporeus tenyésztése útján állítanak elő. A staurosporint a J. C. S. Chem. Comm., 1978, 800—801 és J. Antibiotics 30, (4), 275—282 (1977) közlemények ismertetik. Az Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 19 (6), 459—460 (1980) ismertet több olyan, indolvázas színanyagot, amelyet az Arcyria denudata nyálkagomba artrospóráiból különítettek el, e vegyületek szerkezeti rokonságban állnak a staurosporinnal. E színanyagok közül néhány hatásos a Bacillus brevis-szel és Bacillus subtilis-szel szemben. A jelen találmány tárgya eljárás a (II) képlettel jellemezhető, a jelen leírásban 4’-deklór-rebekkamicin néven említett, új daganatellenes antibiotikum előállítására, elkülönítésére és tisztítására, e műveletek során a 4’-deklór-rebekkamicint lényegében tiszta formában állítjuk elő. A jelen találmány szerinti antibiotikumot úgy állítjuk elő, hogy a Nocardia aerocolonigenes-nek egy — 4’-deklór-rebekkamicint termelő — törzsét a Nocardia aerocolonigenes C38 383-RK2 (ATCC 39243) jelzésű törzsét vagy ennek valamely mutánsát vizes táptalajban, süllyesztett, levegőztetett körülmények között mindaddig tenyésztjük, míg az említett mikroorganizmus által az említett táptalajban termelt 4’-deklór-rebekkamicin jelentős mennyisége fel nem halmozódik a táptalajban, és kívánt esetben a 4’-deklór-rebekkamicint elkülönítjük a táptalajból, mégpedig lényegében a melléktermékektől mentes állapotban. A 4’-deklór-rebekkamicin antimikrobiális hatást mutat, továbbá kísérletes állati daganatokra, például egereken a P-388 jelzésű leukémiára is hat. A jelen találmány szerinti vegyületet, a 4’-deklór-rebekkamicint úgy állítjuk elő, hogy a Nocardia aerocolonigenes-nek egy 4’-deklór-rebekkamicint termelő törzsét tenyésztjük. A 4’-deklór-rebekkamicint termelő törzsek közül különösen előnyös a 4 487 925 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban ismertetett törzs, amely a rebekkamicint termeli. Azt találtuk, hogy e mikroorganizmus tenyésztése során a rebekkamicin mellett a jelen találmány szerinti vegyület, a 4’-deklór-rebekkamicin is keletkezik. Ezt az előnyös, termelő mikroorganizmust, 2 1 amelynek jelzése C38 383-RK2, egy panamai talajmintából különítettük el. E törzs tenyészeteit letétbe helyeztük az Amerikai Típustenyészetek Gyűjteményében (American Type Culture Collection, Rockville, Maryland)-, a tenyészetek a mikroorganizmusok ezen állandó gyűjteményéhez tartoznak, számuk: ATCC 39243. A C38 383-RK2 jelzésű törzs rendszertani vizsgálatainak eredményei azt mutatják, hogy ez a törzs a Nocardia nemzetség egy atipusos fajához tartozik. Az alábbi jellemzők alapján úgy véljük, hogy a C38 383-RK2 jelzésű törzs a Nocardia aerocolonigenes fajhoz tartozik. A C38 383-RK2 jelzésű törzs tulajdonságai az alábbiak: Alaktani tulajdonságok A C38 383-RK2 jelzésű törzs sejtjei egyenként egymáshoz kapcsolódva fonalakat képeznek, amelyek szubsztrát-micéliumot és légmicéliumot alkotnak. Mindkét micélium hoszszú, nem elágazó láncokból áll, és nem tagozódik rövid fonalakra (a fonalak szélessége 0,5 pm). Az artrospórák a légmicélium teljes egészében keletkeznek. Ezek a spórák az üres gombafonalakba beékelődve helyezkednek el, vagy pedig folyamatos láncot alkotnak. A Nocardiopsis dassonvillei spóráihoz hasonlóan (Inti. J. Syst. Bacteriol., 26, 487—493- 1976), a C38 383 jelzésű törzs légmicéliumának gombafonalai hosszú szakaszokra oszlanak, amelyek szabálytalan alakú spórákból állnak. A gombafonalakba beékelt spórák vagy a folyamatos spóraláncok egyenesek vagy tekervényesek. Vannak hosszú spóraláncok, amelyek 50—100 spórát is tartalmaznak, és emellett rövidebb vagy mérsékelten hosszú spóraláncok is. A spórák hengeres alakúak, 0,5—0,7 x 0,7—5 pm méretűek, felületük sima. A légmicéliumban keresztfalak vannak, de spóratartók, mozgékony spórák és spirálok nincsenek. Tenyésztési tulajdonságok A C38 383 jelzésű obiigát aerob actinomycète, amely a legtöbb agartartalmú táptalajon jól növekszik. A légmicélium bőségesen növekszik Czapek-féle szacharóz-nitrát agáron, ISP Medium No. 2, 4, 5 és 7 jelzésű táptalajon nutrient agaron és Bennett-féle agaron, de kevéssé növekszik glükóz-aszparagin agaron és ISP Medium No. 3 és 6 jelzésű táptalajon. A légmicélium színe fehér, sárgásfehér vagy halványsárga. A szubsztrát-micéliumban egy sárgásszínű színanyag keletkezik, amely kismértékben belediffundál az agaros táptalajba. Ez a színanyag nem pH-indikátor. Melanoid színanyag nem keletkezik. A törzs tenyésztési tulajdonságait az I. táblázatban mutatjuk be. Élettani tulajdonságok A C38 383 jelzésű törzs optimális növekedési hőmérséklete 28°C és 37°C között van, 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
