193941. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 6-helyettesített-4-dialkil-amino-tetrahidro-benz (c,d) indolszármazékok előállítására
193941 gon), és a pH = 7,4-es, 0,05 mólos trisz-puffer-oldaton kívül. A szerotonin kötődését Bennett és Snyder módszerével [Mol. Pharmacol., 12, 373—389 (1976)], a triciált spiperon kötődését pedig Peroutka és Snyder módszerével [Mol. Pharmacol., 16, 687—689 (1979)] határozzuk meg. A mintákat 15 percig 37°C hőmérsékleten inkubáljuk, majd GF/ /C jelzésű üvegszálas szűrőágyakon, a receptor-kötődés vizsgálata céljából átalakított Brandei M-24 sejtszűrő segítségével leszűrjük. A kiszűrt anyagokat kétszer 5 ml mosófolyadékkal kimossuk, majd szcintillációs fiolákba tesszük, és a radioaktivitást 10 ml Amersham PCS jelzésű szcintillációs folyadékban mérjük. A triciált szerotonin (3H-5HT) nem-specifikus kötődését 10*5 mól szerotonin jelenlétében, a triciált spiperon nem-specifikus kötődését' pedig 10'6 mól lizergsav-dietil-amid jelenlétében határozzuk meg. A specifikus kötődést úgy számítjuk ki, hogy a nem-radioaktív anyag nélkül mért teljes kötődésből kivonjuk a nem-specifikus kötődést. Meghatározzuk az IC50-értékeket, ahol az IC50-érték az anyagnak az a koncentrációja, amely a specifikus kötődést 50 százalékban gátolja (a méréseket a 10-9 és 10'4 mólos koncentráció-tartományban, 10— 12 koncentráció-értéknél végezzük). A triciált ligandumok koncentrációja: szerotonin (Amersham, 407 GBq/mmól): 2- 3 nmól; lizergsav-dietil-amid (Amersham, 66,6 GBq/ /nmól): 1,8—2,6 nmól; spiperon (Amersham, 740 GBq/nmól): 0,6— 0,7 nmól. Az eredményeket az I. táblázatban adjuk meg! I. Táblázat Receptor-kötődés Vegyület neve Triciált ligandumokkal mért IC50-értékekx Triciált Triciált szerotonin spiperon 43 (±)-4-di(n-propil)-amino-6- -amino-karbo- . nil-1,3,4,5- -tetrahidro-benz [c,djindol 60 4980 (±)-4-di(n-propií)-amino-6--ciano-1,3,5,6--tetrahidro-I. Táblázat (folytatás) Receptor-kötődés Vegyület neve Triciált ligandumokkal mért ICso-értékekX 44 Triciált Triciált szerotonin spiperon -benz[c,dj indol (+)-4-di(n-propil)-amino-6- -nitro-1,3,5,6- -tetrahidro-90 390-benz £c,djindol (±)-4-di(n-propil)-amino-6- -metoxi-1,3,4,5- -tetrahidro-100 400-benz jc,dJindol (+)-4-dimetil-amino-1,3,4,5- -tetrahidro-50 950-benz £c,djindol 120 730 = A gátló anyag nanomolokban kifejezett koncentrációja. Másodsorban — mint a központi szerotonin agonista hatásra jellemző adatot — meghatározzuk az agyban a szerotonin metabolitjainak mennyiségi csökkenését. A dopamin agonista hatásra jellemző adatként meghatározzuk a dopamin metabolitjainak mennyiségi változásait is. A kísérleteket a következőképpen végezzük: 150—200 g testsúlyú Wistar-patkányoknak szubkután (bőr alá) 0,3 mg/kg (±)-4-di(n-propil) -amino-6-helyettesített-1,3,4, ö-tetrahid* ro-benz [c,d] indolt adunk. 1 óra múlva az állatok fejét levágjuk, a hypothalamust és a corpus striatumot kimetsszük és kivonatoljuk. A corpus striatumban levő homovanillinsav és a 3,4-dihidroxi-fenil-ecetsav menynyiségét, valamint a hypothalamusban levő 5-hidroxi-indol-ecetsav mennyiségét nagyfelbontású folyadék-kromatográfiával, elektrokémiai detektálással határozzuk meg. Ugyancsak megmérjük a szérumban levő kortikoszteroidok mennyiségét. A kísérlet eredményeit a II. táblázatban adjuk meg. A táblázatban az 1. és 2. oszlop tartalmazza a (IV) általános képletű vegyületek helyettesítőit, a 3-5. oszlopban a szerotonin és dopamin metabolitjainak koncentrációja, a 6. oszlopban pedig a szérumban levő kortíko - szteroidok koncentrációja szerepel. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
